【求助】感受态与质粒转化

最新回复

• hustwb (2015-1-29 10:58:36)

  那就是感受态有问题，感受态为什么要放4°冰箱，不放-80°呢？

• hustwb (2015-1-29 10:59:55)

  
  感受态的制备有问题吧

• flower-201 (2015-1-29 11:00:53)

  感受态的制备过程都要完全无菌，我们有次装CaCl2的瓶子灭后没盖紧，之后感受态也是有问题。
  

• idoww (2015-1-29 11:02:37)

  你用是什么载体？抗性没用错吧？

• 1221 (2015-1-29 11:03:26)

  感受态放四度那么长时间还能用吗？？？

• ztonyc (2015-1-29 11:03:46)

  制备感受态是个细活，一般实验室都不自制啦！ 都买现成的，可以保证效率的！
  还有感受态保存时放-80,！

• memory (2015-1-29 11:04:20)

  制备感受态和转化就这点步骤的话那就步骤有问题啊，感受态细胞在4度防止时间在24小时内活性是会有一定的增加的，还有你转化过后就直接涂板应该是不行的，不是有一步是在预热的不含抗生素的培养基里37度摇培一小时左右后在收菌涂布的吧

• jiushikeshui371 (2015-1-29 11:05:08)

  感受态  我都是在4度放24小时再用，质粒转化效率应该很高的，这都很难说，一个小细节错误也许就败了。

• 66+77 (2015-1-29 11:06:05)

  检查一下氨苄的浓度，是不是太高，我的是50-100微克每毫升LB。

• bluelake (2015-1-29 11:06:37)

  那就是感受态有问题，感受态为什么要放4°冰箱，不放-80°呢？
  
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  那是因为做好了感受态接着就做质粒转化啊，放-80℃那不是又要活化吗？

• bluelake (2015-1-29 11:07:18)

  检查一下氨苄的浓度，是不是太高，我的是50-100微克每毫升LB。
  
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  我用的也是50微克每毫升LB

• hustwb (2015-1-29 11:07:39)

  板没问题吧？？

• tieshazhang (2015-1-29 11:08:03)

  估计是感受态问题，我们都是做完感受态液氮速冻后放在-80，全程在4度或者冰上无菌操作。再说里面加甘油了，不到5分钟就化了，楼主为啥要放在4度？

• 小鱼鱼 (2015-1-29 11:08:27)

  做感受态细胞的时候细菌活力很重要啊，一定要在对数期。

• shanzhapia696 (2015-1-29 11:08:44)

  
  制备完感受态要放入-80℃保存啊，转化时取出来置于冰上自己融，然后就加质粒开始转化了啊，怎么还要活化？

• rxcc33 (2015-1-29 11:10:18)

  不然去公司订几只感受态做一下，有保证，我们原来自己做，现在都是从公司订。正好也鉴别下是不是你的感受态的问题。

• gogo (2015-1-29 11:12:17)

  
  感受态现做现用吧

• bluelake (2015-1-29 11:12:51)

  估计是感受态问题，我们都是做完感受态液氮速冻后放在-80，全程在4度或者冰上无菌操作。再说里面加甘油了， ...
  
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  我是做了感受态以后，接着就要做质粒转化，所以就没有放到-80℃保存，因为不是批量做感受态，而是放在4℃条件下12h，第二天做质粒转化，这样不行吗?一定要放-80℃吗？
  

• bluelake (2015-1-29 11:13:23)

  做感受态细胞的时候细菌活力很重要啊，一定要在对数期。
  
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  摇菌一般也是过夜12h，应该菌的活力是可以保证吧？

• rxcc33 (2015-1-29 11:14:24)

  制备完感受态要放入-80℃保存啊，转化时取出来置于冰上自己融，然后就加质粒开始转化了啊，怎么还要活化？
  
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  制备好的感受态一定要放-80℃保存吗，即使不是批量做，第二天就要做质粒转化？-80℃的感受态取出来化冻就可以直接做质粒转化？转化率会下降吗？