【讨论帖】EGFP细胞膜表达情况分析

最新回复

• zbboom (2015-3-17 19:30:44)

  zoom放大后，出现第二张图片

  
  20120701_z0.jpg

• zbboom (2015-3-17 19:31:12)

  我的问题是：荧光应该出现在膜上或者细胞上，为何没有细胞的地方也出现了如此亮的荧光？荧光颜色是对的。
  
  第二个盖玻片出现的情况：

  
  Series018_z0.jpg

• zbboom (2015-3-17 19:32:52)

  虽然图片质量比较差，可是还能说得过去，主要还是质粒表达效率低。

• xevin (2015-3-17 19:33:21)

  是不是荧光照射培养液产生的，培养液有很多不溶的小颗粒反射和折射绿色光线，使你看见都是绿的，你可以稀释一下再观察。没有做过你这实验，自己瞎猜的，如果找到原因分享下吧？

• baidukk (2015-3-17 19:36:18)

  
  有可能是细胞的问题

• bangqi_k (2015-3-17 19:37:22)

  共聚焦绿色荧光的接收范围有点宽了，调窄一点一点。

• zbboom (2015-3-17 19:37:51)

  QUOTE:

  原帖由 bangqi_k 于 2015-3-17 19:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  共聚焦绿色荧光的接收范围有点宽了，调窄一点一点。

  505-515nm
  还宽啊？

• bangqi_k (2015-3-17 19:38:46)

  QUOTE:

  原帖由 zbboom 于 2015-3-17 19:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  505-515nm
  还宽啊？

  那可能是玻璃片不干净，就是培养液或其他东西

• zbboom (2015-3-17 19:39:05)

  这些问题我感觉还得请教学物理学的童鞋。

• leifengta (2015-3-17 19:41:24)

  
  做膜表达时，最好用DAPI染一下细胞核，然后叠加，会很好观察的！

• lagua123 (2015-3-17 19:41:48)

  
  我认为可能是细胞表达后分泌到细胞外了，最后一张图明显细胞质里有大量荧光，表达量还是很高的。

• zbboom (2015-3-17 19:44:58)

  
  问题现在已经解决了。原来是质粒上根本没有表达EGFP。经过努力，现在已经得到非常好的绿色荧光蛋白而且表达于细胞膜上。

  
  Image006_ch00.jpg

• mybioon (2015-3-17 19:45:27)

  
  拍照时将培养基换成不含酚红的PBS等缓冲液，背景荧光会消失
  

• nikun230 (2015-3-17 19:45:45)

  背景高

• hold住 (2015-3-17 19:47:16)

  你这个是在荧光显微镜下观察的吧？在拍摄或者观察荧光的时候要将荧光的强度打到最低，暗光观察荧光的，拍照的时候曝光的时间及zoom值不一定要很大，适合就可以了；再者是培养基里面的很多颗粒都是吸收光的，看上去也是有荧光，但是只要将光线调暗，出现的荧光就会消失

• zbboom (2015-3-17 19:47:43)

  QUOTE:

  原帖由 hold住 于 2015-3-17 19:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  你这个是在荧光显微镜下观察的吧？在拍摄或者观察荧光的时候要将荧光的强度打到最低，暗光观察荧光的，拍照的时候曝光的时间及zoom值不一定要很大，适合就可以了；再者是培养基里面的很多颗粒都是吸收光的，看上去也是有荧光，但是 ...

  谢谢，问题已经解决，是GFP前出现终止密码子。