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【讨论帖】EGFP细胞膜表达情况分析
【讨论帖】EGFP细胞膜表达情况分析
EGFP表达在HEK293细胞膜上,HEK293细胞培养在24孔板中,转染24小时候,把盖玻片放在普通的玻璃平皿中进行共聚焦观察,选择10*物镜,出现如下图片:
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Series016_z0.jpg
字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2015-3-17 19:30 作者: zbboom 来源: 分析测试百科网
Series016_z0.jpg
最新回复
zbboom (2015-3-17 19:30:44)
20120701_z0.jpg
zbboom (2015-3-17 19:31:12)
第二个盖玻片出现的情况:
Series018_z0.jpg
zbboom (2015-3-17 19:32:52)
xevin (2015-3-17 19:33:21)
baidukk (2015-3-17 19:36:18)
有可能是细胞的问题
bangqi_k (2015-3-17 19:37:22)
zbboom (2015-3-17 19:37:51)
QUOTE:
505-515nm还宽啊?
bangqi_k (2015-3-17 19:38:46)
QUOTE:
那可能是玻璃片不干净,就是培养液或其他东西zbboom (2015-3-17 19:39:05)
leifengta (2015-3-17 19:41:24)
做膜表达时,最好用DAPI染一下细胞核,然后叠加,会很好观察的!
lagua123 (2015-3-17 19:41:48)
我认为可能是细胞表达后分泌到细胞外了,最后一张图明显细胞质里有大量荧光,表达量还是很高的。
zbboom (2015-3-17 19:44:58)
问题现在已经解决了。原来是质粒上根本没有表达EGFP。经过努力,现在已经得到非常好的绿色荧光蛋白而且表达于细胞膜上。
Image006_ch00.jpg
mybioon (2015-3-17 19:45:27)
拍照时将培养基换成不含酚红的PBS等缓冲液,背景荧光会消失
nikun230 (2015-3-17 19:45:45)
hold住 (2015-3-17 19:47:16)
zbboom (2015-3-17 19:47:43)
QUOTE:
谢谢,问题已经解决,是GFP前出现终止密码子。【讨论帖】EGFP细胞膜表达情况分析