【求助】"体外培养的原理和技术"中MTT的...

字体: 小中大 | 打印发表于: 2012-10-07 19:06 作者: cocacola 来源: 分析测试百科网

今天翻了一下薛庆善编的"体外培养的原理和技术"一书发现P343中关于MTT实验中使用的检测波长为490nm.因为该实验本人经常有做,但一般用的是570nm,查了一下文献发现也没有人报道490nm.看来是有点问题.且该实验方法使用0.04-0.1mol/盐酸异丙醇溶解结晶只在微量振荡器上振荡5min.而有报道该溶解液的溶解能力很差需要18小时才能完全溶解.

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DDD (2012-10-07 19:07:12)

MTT的确是570nm检测，490nm是检测 MTS的。
当然用用DMSO是可以立即溶的，
但是用异丙醇或SDS就要过夜了
00无名指00 (2012-10-07 19:07:34)

570nM和490nm两种波长都能用于MTT法的测定，对于DMSO为溶剂而言，570nm最好，490nm也有人用过，可以看看司徒镇强《细胞培养》187页。我记得在某些外刊上面还有使用597nm（记得不是太清楚）。
cocacola (2012-10-07 19:08:00)

570nM和490nm两种波长都能用于MTT法的测定，对于DMSO为溶剂而言，570nm最好，490nm也有人用过，可以看看司徒镇强《细胞培养》187页。我记得在某些外刊上面还有使用597nm（记得不是太清楚）。

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呵呵，因为手头上没"细胞培养"一书，我又查了一下外文有关MTT的文章，仍没有用别的波长的。但如果570nm是最好的何需要用别的？我下周有个结果是用MTT检测的，倒是可以验证一下选用570nm和490nm对实验的影响。而597这个波长我们机子没有。如果楼上能找到那篇文章请发给我，谢谢。
utt0989 (2012-10-07 19:08:49)

570nm是其最大吸收波长。当然效果会最好的了。
当然检测波长选择在550nm-600nm之间都可以了。
参考波长宜选择在650nm之后。
eric930 (2012-10-07 19:09:16)

你可以在置顶处找到司徒镇强的《细胞培养》电子版。我们这儿用的是570nm，DMSO溶解，结果很好。
cocacola (2012-10-07 19:09:45)

你可以在置顶处找到司徒镇强的《细胞培养》电子版。我们这儿用的是570nm，DMSO溶解，结果很好。

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我知道angelmi有发，但是我没能拿到，连不上他列出的两个FTP地址，：（。如果你有，可否发一份给我？谢谢！

blackearthlam@163.com
summerxx (2012-10-07 19:10:05)

这可能与一般的酶标仪不给标准配置570nm的滤光片有关，有些实验室的酶标仪（包括许多进口的所谓的全自动酶标仪）因为没有570nm片，就用其他的滤光片测定，估计也有结果（也就是可以在不同细胞密度时可以测出差别），就对付着用，如果将错就错，还写到书里，就不好了。

如果有心的话，将甲臢(formazan)溶解后的液体用分光光度计扫描一下，得到在不同波长的吸光度，就什么都知道了。
utt0989 (2012-10-07 19:10:30)

不是告诉你550nm-600nm都可以么！！
570是最大吸收波长，当然效果是最好的，
在相近的波长如果数值当然会低些。但是如果不同组间有差异，也就将就了。
cocacola (2012-10-07 19:11:02)

QUOTE:
原帖由 utt0989 于 2012-10-7 19:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
不是告诉你550nm-600nm都可以么！！
570是最大吸收波长，当然效果是最好的，
在相近的波长如果数值当然会低些。但是如果不同组间有差异，也就将就了。 ...
呵呵，那490nm行吗？
既然570是最大吸收波长，那么作为一个实验手册是不是应该以此作为第一选择？
谢谢你的意见。
kuaizige (2012-10-07 19:11:51)

可以先在分光光度计下测定溶液的最大吸光度值在哪个波长，再在这个波长下测定该溶液的吸光度值。
cocacola (2012-10-07 19:12:14)

今晚做了一板MTT测定，分别用490和570去做，结果是570的吸收值比490的要大，如其中一个样的三个重复孔OD570值分别为0.490，0.508，0.582；而OD490值则分别为0.433，0.475，0.490。而OD630也有吸收，分别是0.212，0.179，0.171。本实验用DMSO作为溶解液的。