【求助】为什么我的蛋白质SDSPAGE总是分不开的?

最新回复

• tuuu2 (2014-7-03 18:15:11)

  
  样品量少些看看行不行

• nn255 (2014-7-03 18:15:35)

  
  1。蛋白上样量太多了，一般20-40微克足够。
  2。一抗或二抗的浓度太高。
  3。没洗净杂质蛋白。

• veiwu (2014-7-03 18:15:57)

  
  谢谢。我的没有一抗或二抗，就常规的冲植物根组织中的提取总蛋白。蛋白少一点要稍微好一点，但还是分不开的。

• summerxx (2014-7-03 18:16:25)

  
  1。样品处理不好，可能含有核算或盐太高，建议用超升仪器处理一下；
  2。上样品量太大，如果用7厘米的小胶，样品量应在10ug左右最好；
  3。调整胶浓度试试。

• veiwu (2014-7-03 18:17:11)

  
  我把SDS-PAGE图像给船上来了，大家帮我分析一下的。谢谢
  对于牛的样品，为什莫前面是哪个丑样啊。根是不是浓度低了一点，为什莫每个样品按照泳道的方向都有一条条细的空白，是不是有杂质的。还有好像有的样品还有些东西没有跑下来的，是什莫原因的。谢谢了。是7厘米的胶，为10-20%，上样都为20微升。考马斯染色的。

  
  60710286.jpg

• XYZQ (2014-7-03 18:17:35)

  
  相关疾病：
  脱水
  没做过植物样品，提几点建议：
  1、stem 样品量还应减少，而左数第二、三样品量可适当增加。bull样品量看你要的蛋白分子量是多少，大的话可稍微增加，小的话就不用了，甚至可以减少。可以稀释后仍加20ul
  2、不知道你电泳时的电压是多少，一般情况下积层胶用80v，分离胶用120～180v可以跑得不错。
  3、挨着样品的空白泳道可以加等量的loading buffer，这样样品不会跑歪。
  4、没用过直接买的胶，不知道是什么样的。不知道你买回来怎么保存的，有没有脱水现象？
  希望有用！

• BOSS2011 (2014-7-03 18:19:35)

  
  1、同意楼上的“stem 样品量还应减少，而左数第二、三样品量可适当增加。”，但个人认为bull的样品中蛋白质分子量好像比较低，所以建议bull的样品电泳时应换用胶浓度比较高的单独进行电泳
  2、电泳图中bull和stem的上样槽下方到分离胶、浓缩胶的界面中均有蓝色的条带，说明：
  其一可能你的上样样品离心没有处理好，含有一些杂质颗粒
  其二或者是样品中的某些成分影响电泳（8M尿素我试过，不会影响电泳效果的，tris仅用其做过buffer，浓度为100mM也不会影响电泳，CHAPS没有用过，但我做过CTAB及曲拉通－100这些表面活性剂，浓度较高时会在一定程度上使电泳条带变糊。不知道你的tris与CHAPS浓度多大？）
  其三可能是上样浓度太高了，也会在一定程度上出现该现象
  3、从你的蛋白Marker电泳结果看来，胶本身应该不会有问题，问题还是处在上样的样品上，若考虑到1、2两种情况后，还没有得到改善的话，建议楼主将上样液中具体含有哪些组分及各种组分的含量都写出来，最好样品的抽提步骤也能附上，这样大家才能够帮你具体分析！
  Good Luck!

• c86v (2014-7-03 18:19:52)

  
  从电泳图片上看，MARKER跑得不错，说明电泳是没有问题的，我看问题主要是出在你的样品上，一般来讲，样品中的盐浓度（比如你所提到的尿素）会对电泳造成较大的影响而出现你图片上的结果，你可以试试将你的样品透析后再进行电泳。