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【求助】感受态与质粒转化
最近做感受态与质粒转化的实验总是长不出菌来。所用的菌是DH-5α,先按步骤制出感受态,接着在4℃冰箱中放12-14小时,再进行质粒转化。所用的标准质粒是6p-1,转化后的菌液是涂布在含有氨苄的平板上,并且设置了阴性对照与阳性对照,但是无论是实验组还是对照组都长不出菌来。所用的CaCl2也是重新配过的。请问这个问题是出在哪?【求助】感受态与质粒转化
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【求助】感受态与质粒转化
字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-12-06 10:04 作者: yonger 来源: 分析测试百科网
最新回复
feima+ (2014-12-06 10:05:44)
那就是感受态有问题,感受态为什么要放4°冰箱,不放-80°呢?
rxcc33 (2014-12-06 10:11:18)
感受态的制备有问题吧
idea2011 (2014-12-06 10:11:39)
any333 (2014-12-06 10:12:08)
pulala (2014-12-06 10:12:36)
感受态放四度那么长时间还能用吗???
dodoit (2014-12-06 10:17:43)
还有感受态保存时放-80,!
1472583690 (2014-12-06 10:22:00)
制备感受态和转化就这点步骤的话那就步骤有问题啊,感受态细胞在4度防止时间在24小时内活性是会有一定的增加的,还有你转化过后就直接涂板应该是不行的,不是有一步是在预热的不含抗生素的培养基里37度摇培一小时左右后在收菌涂布的吧
toy (2014-12-06 10:22:17)
dodoit (2014-12-06 10:25:10)
检查一下氨苄的浓度,是不是太高,我的是50-100微克每毫升LB。
yonger (2014-12-06 10:26:23)
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那是因为做好了感受态接着就做质粒转化啊,放-80℃那不是又要活化吗?
yonger (2014-12-06 10:28:52)
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我用的也是50微克每毫升LB
glass (2014-12-06 10:29:12)
wu11998866 (2014-12-06 10:29:31)
66+77 (2014-12-06 10:31:12)
做感受态细胞的时候细菌活力很重要啊,一定要在对数期。
987789 (2014-12-06 10:34:48)
rxcc33 (2014-12-06 10:35:07)
不然去公司订几只感受态做一下,有保证,我们原来自己做,现在都是从公司订。正好也鉴别下是不是你的感受态的问题。
gogo (2014-12-06 10:35:29)
感受态现做现用吧
yonger (2014-12-06 10:38:11)
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我是做了感受态以后,接着就要做质粒转化,所以就没有放到-80℃保存,因为不是批量做感受态,而是放在4℃条件下12h,第二天做质粒转化,这样不行吗?一定要放-80℃吗?
yonger (2014-12-06 10:38:53)
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摇菌一般也是过夜12h,应该菌的活力是可以保证吧?
yonger (2014-12-06 10:43:45)
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制备好的感受态一定要放-80℃保存吗,即使不是批量做,第二天就要做质粒转化?-80℃的感受态取出来化冻就可以直接做质粒转化?转化率会下降吗?
【求助】感受态与质粒转化