【求助】细胞转染后细胞总是死是怎么回事？

字体: 小中大 | 打印发表于: 2014-12-06 11:17 作者: 33号来源: 分析测试百科网

我最近在做细胞转染，用的是鱼的细胞系，贴壁生长，用MEM培养基加10%的FBS培养，转染实验时，将细胞接入6孔板里，待贴壁后，将培养基吸出，用opti-MEM无血清培养基洗两次，然后每孔加2mlopti-MEM无血清培养基，加预先混好的Lipo2000与质粒的混合稀释液，每孔加0.5ml，待4h后，换成正常培养液，然而在4h换液时，细胞已经有大量的死亡，换液后细胞也没有变好，不知道是什么原因，请各位大侠帮忙分析一下吧~~
还有，转染试剂是应该用无血清培养基稀释吧？用正常培养基稀释会不会有什么问题呢？

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【求助】细胞转染后细胞总是死是怎么回事？

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最新回复

loli (2014-12-06 11:17:36)

你的质粒有去内毒素吗？还有那个“预先混好的Lipo2000与质粒的混合稀释液”比例是怎样的？Lipo2000对细胞也是有毒性的，还有转染时细胞的密度是多少？
33号 (2014-12-06 11:18:16)

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原帖由 loli 于 2014-12-6 11:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

你的质粒有去内毒素吗？还有那个“预先混好的Lipo2000与质粒的混合稀释液”比例是怎样的？Lipo2000对细胞也是有毒性的，还有转染时细胞的密度是多少？ ...
质粒是用无内毒素的试剂盒提取的，分别用250微升opti-MEM稀释质粒4微克、Lipo2000 10微升，然后混合均匀，20分钟后加入到孔里。细胞密度大约是10*6吧，请问我哪里出问题了呀？非常感谢！
loli (2014-12-06 11:18:37)

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原帖由 33号 于 2014-12-6 11:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

质粒是用无内毒素的试剂盒提取的，分别用250微升opti-MEM稀释质粒4微克、Lipo2000 10微升，然后混合均匀，20分钟后加入到孔里。细胞密度大约是10*6吧，请问我哪里出问题了呀？非常感谢！ ...
可能是Lipo2000 本身对细胞的毒性较大，我之前也是用Lipo2000 做的转染，效果也不是很好，后面我换了Lipofectamine™ LTX Reagent，感觉比Lipo2000好些，当时是一个师姐定有，借用来试了一下，后面我们实验室都改订Lipofectamine™ LTX Reagent了，你可以试一下，仅供参考。
49888 (2014-12-06 11:18:57)

支持楼上的说法，Lipo2000对细胞伤害还是很大的。鱼的细胞系没有做过，具体什么比例没有摸索过。你可以适当的摸索一下Lipo2000与质粒的转染比例，寻找最佳的转染条件。可以试试polo。
mingming0638 (2014-12-06 11:19:16)

降低转染量试试，转染试剂对细胞毒性较大，我们实验室早已经不用Lipo2000了，一方面是它用量大毒性大，二则是太贵了。
33号 (2014-12-06 11:19:34)

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原帖由 mingming0638 于 2014-12-6 11:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
降低转染量试试，转染试剂对细胞毒性较大，我们实验室早已经不用Lipo2000了，一方面是它用量大毒性大，二则是太贵了。
那请问你们现在都用什么牌子的转染试剂呢？谢谢~
mingming0638 (2014-12-06 11:19:52)

Vigofect，应该是叫这个名字，同体积下便宜很多，而且用量少几倍，不需要用无血清培养基换液，通常用在293T呀HCT116呀是没区别的，但是对于一些转染效率低的细胞系来说，效果还是不如LIPO，一分钱一分货嘛
idea2011 (2014-12-06 11:20:12)

可以免费试用一下美国SignaGen的转染试剂，效率高而且毒性低，价格也很便宜