【求助】如何测细胞的蛋白浓度啊？

字体: 小中大 | 打印发表于: 2015-3-17 19:48 作者: eve_49 来源: 分析测试百科网

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【求助】如何测细胞的蛋白浓度啊？

大家好！我想测细胞的蛋白浓度，找了很多资料说有BCA法，但是没有详细介绍怎么做啊？细胞要先经过什么处理然后再加BCA法测定蛋白的那些试剂呢？希望有做过类似实验的大侠们，给指条明路哈

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蛋白之安基 (2015-3-17 19:48:56)

细胞要先提蛋白，一般是用RIPA来提的。然后再测蛋白浓度。
eve_49 (2015-3-17 19:49:26)

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原帖由 蛋白之安基 于 2015-3-17 19:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

细胞要先提蛋白，一般是用RIPA来提的。然后再测蛋白浓度。
也就是说，如果我要用BCA法测的话，我只要把细胞裂解离心后，取上清加BCA工作液就可以测了吗？是这个意思吗？
蛋白之安基 (2015-3-17 19:51:29)

QUOTE:
原帖由 eve_49 于 2015-3-17 19:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

也就是说，如果我要用BCA法测的话，我只要把细胞裂解离心后，取上清加BCA工作液就可以测了吗？是这个意思吗？
是的
BUK (2015-3-17 19:53:18)

QUOTE:
原帖由 eve_49 于 2015-3-17 19:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

也就是说，如果我要用BCA法测的话，我只要把细胞裂解离心后，取上清加BCA工作液就可以测了吗？是这个意思吗？
是的，测定一般需要半个小时。
xueyouzhang (2015-3-17 19:53:44)

现在有紫外分光光度计微型的能在一秒钟内测出你提取蛋白的相对浓度
fei1226com (2015-3-17 19:54:40)

我用的是碧云天的BCA试剂盒，效果还不错，就是需要等（温度要恒定），切记先把蛋白与PBS混匀后再加200微的工作液！
iii_ii (2015-3-17 19:55:00)

是，分光光度计可测，挺准的。
panda王 (2015-3-17 19:55:27)

“现在有紫外分光光度计微型的能在一秒钟内测出你提取蛋白的相对浓度”，这种方法适用于体系中成分相对简单的蛋白质浓度测定，如果体系比较复杂有很多的干扰因素，这种方法的原理基于测定280nm的吸光度，如果体系中有其他的的280nm干扰物质，测定结果非常不准确。根据你裂解细胞的方法可以有不同的测定方法，减少干扰。