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表面活性剂清除法测定血清(浆)低密度脂蛋白-胆固醇
关键词：生物成分分析标准物质 兽药标准品 矿石成分分析 烟煤成分分析标准物质表面活性剂清除法测定血清(浆)低密度脂蛋白-胆固醇
美国CDC推荐LDL-C测定的暂定参考方法为超速离心法(beta-quantification，beta-定量法／BQ法)，也为NCEP所推荐。此法所测定LDL-C实际上包括了脂蛋白(a)[Lp(a)]和中间密度脂蛋白(LDL)的胆固醇含量，是评价其他检测方法准确性的基础。但是，此法也是基于超速离心分离LDL组分的方法，因为操作要求高、步骤烦琐、不易自动化、耗时长等种种原因不被临床实验室所采用。
国际上常推荐用Friedewald公式计算LDL—C的浓度。其计算公式为：
LDL-C=TC-HDL-C-TG／5(以mg／dl计)
LDL-C=TC-HDL-C-TG／2．2(以mmol/L计)。
但当空腹血清中存在CM、血清TG>400mg／dl(4．52mmol／L)及血清中存在异常β脂蛋白时(Ⅲ型高脂蛋白血症)不宜采用此公式。
1995年中华医学会检验学会在国内推荐聚乙烯硫酸沉淀法(PVS法)作为LDL-C测定 的常规方法。但其标本也需要离心处理，也易受高TG水平的影响。
目前临床检验科多采用直接匀相测定法检测LDL-C，此法标本用量少，不需沉淀处理， 可用于自动生化仪测定，在准确度和精密度方面都可达到NCEP的分析目标。直接匀相测定法测定LDL-C根据原理不同可分为：清除法、透射比浊法、环芳烃法(CAL法)、可溶性反应法、保护性试剂法。表面活性剂清除法为清除法中的一种。
本实验主要介绍表面活性剂清除法测定血清(浆)LDL-C含量。
【实验原理】
表面活性剂清除法试剂I中的表面活性剂1能改变并解离LDL以外的脂蛋白(HDI、CM和VLDL等)结构，所释放出来的微粒化胆固醇分子与胆固醇酶试剂反应，产生的H2O2在缺乏偶联剂时被消耗而不显色，此时LDL颗粒仍是完整的。加试剂Ⅱ(含表面活性剂2和偶联剂DSBmT)，它可使LDL颗粒解离释放胆固醇，参与Trinder反应而显色，因其他脂蛋白的胆固醇分子已除去，显色深浅与LDL-C量成正比。
【试剂与器材】
1．试剂表面活性剂清除法测定LDL-C试剂盒的试剂组成见表。
表面活性剂清除法测定LDL-C试剂盒的试剂组成
组成 初始浓度
试剂I：4-氨基安替比林 0．5mmol/L
胆固醇氧化酶 1．2U／ml
胆固醇酯酶 3U／m1
过氧化物酶 0．5U／ml
GOOD缓冲液 pH 6．3
表面活性剂1 适量
试剂Ⅱ：偶联剂DSBmT 1．0mmol/L
表面活性剂2 适量
GOOD缓冲液 pH 6．3
2．标准物质 采用定值的参考血清作标准。
3．仪器 自动化生化分析仪或分光光度计。
【操作步骤】
1．自动分析法 按仪器和试剂盒说明书操作。
2．手工操作法 取三只试管按表进行操作，根据试剂盒对样品与反应总体积之比的要求，适当增加样品与试剂量，以便于比色。
表面活性剂清除法测定LDL-C操作步骤
加入物(山) 空白管 标准管 测定管
试剂I 300 300 300
生理盐水或蒸馏水 3 一 一
标准液 一 3 一
样本 一 一 3
混合，于37℃保温5分钟，在主波长546nm和副波长660nm下读各管吸光度A1
试剂Ⅱ 100 100 100
混合，于37~C保温5分钟，在主波长546nm和副波长660nm下读各管吸光度A2
【结果计算】
测定管浓度=测定管吸光度（ΔAt）/标准管吸光度（ΔAS）×标准液浓度
ΔA=(A2546﹣A2660)﹣(A1546﹣A1660)
该公式中测定管浓度指分析样本的LDL-C：浓度，标准液浓度指LDL-C标准液的LDL-C浓度，测定管吸光度指分析样本的吸光度值，标准管吸光度指LDL-C标准液的吸光度值。
【参考区间】
合适范围：<3．37mmol／L(130mg／d1)；
边缘性升高：3.37～4．12mmol／L(130～159mg／d1)；
升高：>4．14mmol／L(160mg／d1)。
【临床意义】
LDL-C浓度升高是动脉粥样硬化性心脑血管疾病发生的独立的风险因素，也是心脑血管疾病降脂治疗过程中最重要的监测指标之一。
【注意事项】
1．需使用试剂盒配套校准物准确定值。
2．NCEP对LDL-C测定的分析目标进行了规定，要求总误差≤12％；不精密度要求CV≤4％，不准确度要求偏差≤4%(与p定量法测定参考值比较)。与参考方法进行方法学比较结果应基本一致(相关系数，在0．95以上)。
3．特异性好，高HDL-C、VLDL-c对测定基本无明显影响，回收率为90%～110％。
4．线性范围宽，最小检测水平至少为0．01mmol／L，检测上限至少为7．77mmol／L(300mg/L)。
5．抗干扰能力强；TG<5．65mmol／L(500mg／d1)、胆红素<513μrnol／L(30mg／d1)、血红蛋白<5g/L时，对测定结果基本无干扰。
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