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【求助】溴酚蓝的问题
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大家好，我是那个不能毕业，要死要活的硕士研究生，在大家的帮助下，我的考染图得到了突破性的进步，但是同时又一个新的问题产生了，就是溴酚蓝指示剂，之前跑SDS-PAGE二相时，溴酚蓝指示剂都是一条很清晰的线，但是最近三次溴酚蓝指示剂都是这样弥散的，隐约形成一条线，在图像上的反应就是，大分子量蛋白有拖尾和重叠，可是我的缓冲液每次都是按照操作说明现配现用的，看帖子说如果有重叠和拖尾可能是Tris有问题，但是我这个问题在图像上反应的也不是特别明显，到底是什么原因造成溴酚蓝弥散呢？
下图为正常的溴酚蓝直线图：
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最新回复
sunnyB (2013-11-05 23:17:29)
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sunnyB (2013-11-05 23:17:48)
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ns5fan (2013-11-05 23:18:15)
sunnyB (2013-11-05 23:18:41)
ns5fan (2013-11-05 23:19:14)
我们用的是恒压，100V，1h,200v,跑到离玻璃板边缘1cm处，停止
ns5fan (2013-11-05 23:19:43)
biabiade (2013-11-05 23:20:07)
如果有影响,很可能是配胶的缓冲体系有问题,感觉浓缩胶没起到作用.
sunnyB (2013-11-05 23:20:36)
如果有影响,很可能是配胶的缓冲体系有问题,感觉浓缩胶没起到作用.
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没有浓缩胶，直接跑的是分离胶
sunnyB (2013-11-05 23:20:57)
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其实以前用的GE的旧二相时，是像你这样用电流和电压来控制的，但是工程师说这个仪器就应该控制W，而且最近摸条件也的确是只跑的一块胶
biabiade (2013-11-05 23:21:34)
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啊，GE的工程师说这个电泳槽就应该设置功率？我们的电泳槽和你的是一样的，Ettan DALT Six，这个完全可以设置恒压的，一块胶电泳用功率来设置，和多块胶一起跑还是不同的吧，建议用恒压。
sunnyB (2013-11-05 23:22:02)
QUOTE:
多谢，可能还是配胶的溶液有问题，或者是电泳缓冲液有问题，因为之前跑了大半年都是恒功率，都没遇到这个问题，应该是体系除了错nikun230 (2013-11-05 23:22:30)
我也出现过类似问题，但是发现好像胶没出现什么太大问题，后面也就没管！
sunnyB (2013-11-05 23:22:55)
QUOTE:
OK，的确是配胶的体系出问题了，配制PH8.8的Tris-Hcl时，PH计出问题了，导致ph不是8.8，而是偏碱，重调了之后重新配胶，一切ok，溴酚蓝很直的一条线了，依旧是按照1w/gel，1h，15w/gel，3h跑到底结束ffaa (2013-11-05 23:23:30)
我刚刚跑双向电泳也出现了溴酚蓝扩散现象，刚开始跑时溴酚蓝成大片状扩散，但是跑到下面后扩散出又开始集中，但是溴酚蓝曲线弯曲，不整，现在正在跑着，一会取出固定，明天看一看染色结果。
小游abc (2013-11-05 23:23:50)
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