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氨基酸态氮的测定——双指示剂甲醛滴定法
关键词：有证标准物质 食品安全检测 农药标准品 甲醛标准溶液氨基酸态氮的测定——双指示剂甲醛滴定法
1．原理
氨基酸具有酸性的一COOH基和碱性的一NH2基。它们相互作用而使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液时，一NH。基与甲醛结合，从而使其碱性消失。这样就可以用强碱标准溶液来滴定一COOH基，并用间接的方法测定氨基酸总量。
2。试剂
①40％中性甲醛溶液：以百里酚酞作指示剂用氢氧化钠40％甲醛中和至淡蓝色。
②0．1％百里酚酞乙醇溶液。
③0．1％中性红50％乙醇溶液。
④O．1mol·L-1氢氧化钠标准溶液，标定后使用。
3．操作步骤
移取含氨基酸约20～30 mg的样品溶液2份，分别置于250 mL锥形瓶中，各加50 mL蒸馏水，其中1份加人3滴中性红指示剂，用O．1mol·L-1氢氧化钠标准溶液滴定至由红变为琥珀色为终点；另1份加入3滴百里酚酞指示剂及中性甲醛20 mL，摇匀，静置1 min，用O．1mol·L-1，氢氧化钠标准溶液滴定至淡蓝色为终点。分别记录两次所消耗的碱液体积。
4．计算
氨基酸态氮(％)= [c*( V2-V1)*0.014/m]*100
式中：c——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol·L-1；
V1——用中性红作指示剂滴定时消耗氢氧化钠标准溶液体积，mL；
V2——用百里酚酞作指示剂滴定时消耗氢氧化钠标准溶液体积，mL；
m一测定用样品溶液相当于样品的质量，g；
0.014——氮的毫摩尔质量，g·(mmol) -1。
5. 说明
①此法适用于测定食品中的游离氨基酸。
②固体样品应先进行粉碎，准确称样后用水萃取，然后测定萃取液；液体试样如酱油、饮料等可直接吸取试样进行测定。萃取可在50℃水浴中进行30 min。
③若样品颜色较深，可加适量活性炭脱色后再测定。
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