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【求助】关于Realtime的溶解曲线
各位,昨天做Realtime时,出现奇怪的溶解曲线,想请教一下大家,这是什么原因,谢谢!跑胶的条带还是比较特异的,Realtime的结果重复两个孔之间的误差还是可以接受的,我怀疑是模板的退火温度太高,导致没有完全溶解,请大家看下溶解曲线,帮忙分析下,先谢了!【求助】关于Realtime的溶解曲线
第1张是一个基因PCR的Raw的溶解曲线,第2张是其Derivative的溶解曲线,第3张是另一个基因PCR的Raw的溶解曲线,第4张是其Derivative的溶解曲线,第5张是Realtime的条件。
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【求助】关于Realtime的溶解曲线
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最新回复
tuuu2 (2016-4-08 08:44:09)
第2张
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tuuu2 (2016-4-08 08:44:27)
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tuuu2 (2016-4-08 08:45:32)
第4张
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tuuu2 (2016-4-08 08:46:36)
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ququer787 (2016-4-08 08:46:50)
真的好奇怪啊,我刚刚开始做realtimePCR,不是很理解为什么会出现这种溶解曲线,特别是前三张,按理说应该是有一个Tm值处的高峰来表示大量解链过程的,第四张倒是可以通过Tm值过高来解释。请问wclbdyxb现在找到原因了吗,期待回复哦
tuuu2 (2016-4-08 08:47:13)
嗯,原因应该就是PCR产物的Tm过高,出现这个的原因和机器默认的条件有关,可以把溶解曲线的最后1个温度改到98度,就能出现那个峰了
coolcool (2016-4-08 08:47:28)
u76mp (2016-4-08 08:47:46)
【求助】关于Realtime的溶解曲线