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体液蛋白质测定
关键词：生物成分分析标准物质 食品添加剂检测 环保标准物质 岩石标准物质体液蛋白质测定
依据临床对各种疾病的诊断、鉴别诊断和疗效观察的需求，有时需要测定体液中总蛋白量，或个别蛋白质(Alb、PA、CRP、β2-mG、IgG、IgA、IgE、CEA等)含量，测定的体液样本可来自血清(浆)、尿液和脑脊液等。
在对总蛋白质测定时，常会利用蛋白质的一些特性，如肽链结构；酪氨酸和色氨酸残基的紫外光吸收或与酚试剂反应；与色素结合的能力；沉淀后的浊度；电泳的迁移率大小等来设计蛋白质的测定方法。经典和常见的方法有：①凯氏定氮法(Kieldahl method)：经典的蛋白质测定方法，于1883年建立。该法根据蛋白质平均含氮量16％计算蛋白浓度，结果准确性好，精密度高，灵敏度高，是公认的参考方法。但由于操作复杂、费时，故不适合于血清总蛋白等常规测定，目前主要用于标准蛋白质的定值和对其他方法校正等。②双缩脲法(biurea method)：该法利用蛋白质中的肽键(一CONH一)在碱性溶液中能与Cu2+作用产生紫红色络和物，特异性高、准确度和精密度好，操作简便，显色稳定，虽然灵敏度不高，但能满足临床对血清总蛋白定量测定要求，是临床测定血清总蛋白的常规方法；蛋白质含量很低的其他体液(如脑脊液、胸腹水和尿液等)不适合用双缩脲法。③酚试剂法(phenolreagent method)：利用蛋白中的酪氨酸和色氨酸使酚试剂显色用于蛋白质定量。该法灵敏度高，达到双缩脲法的100倍左右，有利于检出较微量的蛋白质，较适合于单一蛋白质测定。④紫外分光光度法：利用蛋白质分子中芳香族氨基酸在280nm有特征吸收，易受尿酸和胆红素的干扰。核酸最大吸收峰为260nm，在280nm也有较强的光吸收会产生干扰，紫外区220～225nm是肽键的强吸收峰，其吸收值是280nm的10～30倍。紫外分光光度法常用于较纯的酶、免疫球蛋白等蛋白质测定。⑤染料结合法：常用的染料有氨基黑、丽春红、考马斯亮蓝、邻苯三酚红钼等。氨基黑、丽春红常作为血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳或琼脂糖凝胶电泳的染料。考马斯亮蓝常用于蛋白电泳染色，也可用于测定尿液、脑脊液等的蛋白质，灵敏度高，但不同蛋白质与染料的结合力不一致，且试剂对比色杯有吸附作用。邻苯三酚红钼适合于测定尿液、脑脊液等标本中蛋白质含量。⑥化学比浊法：一般用于测定尿液、脑脊液等蛋白质浓度较低的样品。其优点为操作简便、灵敏度高；缺点为影响浊度大小的因素较多，加入试剂的手法、混匀技术、反应温度等都能对浊度形成产生影响，且各种蛋白质形成的浊度亦有较大的差别。
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