【求助】分子量27的蛋白转膜时间？

最新回复

• 3648755 (2014-3-28 15:29:23)

  
  25分钟有点短。
  转膜条件需要摸索。
  个人经验，27Kd，250mA, 1小时足够了。

• dog002 (2014-3-28 15:29:52)

  
  我看这里讨论的转膜时间都是1小时，几小时的，怎么我们实验室的都是几十分钟啊，25到40不等的，很少上一个小时的。

• 3648755 (2014-3-28 15:30:26)

  
  通常如果使用Bio-Rad的标准湿式转膜装置，可以设定转膜电流为300-400mA，转膜时间为30-60分钟。也可以在15-20mA转膜过夜。
  具体的转膜时间要根据目的蛋白的大小而定，目的蛋白的分子量越大，需要的转膜时间越长，目的蛋白的分子量越小，需要的转膜时间越短。
  其实20-30分钟当然也能转过去一部分（或者全部），主要是担心转膜不彻底。如果只是鉴定的话，也无大碍。

• wood533 (2014-3-28 15:30:51)

  湿转，100V，2h

• ffaa (2014-3-28 15:31:36)

  
  我也做一个27kd的蛋白，转膜100v 1小时，丽春红染色未见条带，转膜后的胶考染也是空白，估计转过
  第二次100v 35分钟，丽春红看见条带，量还可以

• ha111 (2014-3-28 15:32:50)

  
  我有次用100mA 5小时湿转，有做出条带。

• remenb (2014-3-28 15:33:28)

  湿转，100V，35min

• 33号 (2014-3-28 15:33:48)

  
  我自己的经验，21KD的，80v,50min,效果良好！

• vcve (2014-3-28 15:34:15)

  
  我也在做p27,80V, 80min,效果很好

• dog002 (2014-3-28 15:34:37)

  
  请问楼上，做出P27漂亮的条带来了吗？我做好久，结果不好，是不是蛋白表达很低，和我的抗体效价不高的原因？（分装进口的，多抗）显影是没有荧光的，郁闷。

• yychen (2014-3-28 15:34:56)

  
  湿转,100V,1.5小时,有加转子,

• tuuu2 (2014-3-28 15:36:44)

  
  跟转膜仪也有关的
  我们用Bio-Red的就是20~25分钟即可

• BOSS2011 (2014-3-28 15:37:02)

  
  Bio-rad的半干转：15v,15min就可以了，湿转：30v,3h效果也很好。

• 66+77 (2014-3-28 15:37:26)

  
  我的目的蛋白大小就在27KDa 左右，我一般用70min .
  本人用的是北京六一公司的槽子，湿转的。

• 莲花白 (2014-3-28 15:37:47)

  
  PVDF膜就没见转过的 ，24KD蛋白400mA, 25V 25min /30min，30V，30min，都转过（北京六一的半干转膜仪），效果都很好 没有差别

• moonlight45 (2014-3-28 15:38:05)

  讨论的好热闹啊，我也说说我的看法吧！！
  我用的是Bio-rad的仪器，湿转，200mA,35min,转移液一般用3-5次，多了的话时间可能就不一样了。

• daod (2014-3-28 15:38:34)

  
  我们用北京六一的半干的槽子，湿转，小于10KD，横流，2小时。电流1mA/平方厘米

• hold住 (2014-3-28 15:39:40)

  自己的经验，bio-rad 半干转膜，15v，20-25min足够了。如果蛋白量比较少，丽春红染色肯能看不到条带。

• greenbee (2014-3-28 15:40:02)

  
  湿转，PVDF, 100V，30min

• join (2014-3-28 15:40:22)

  
  我用250mA，湿转25分钟，效果挺好的