[求助]无液氮罐,如何冻存细胞

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不用液氮罐,在冰箱如何冻存,4度,-20度,-70度各放多久啊?
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最新回复

  • 66小飞侠 (2012-7-27 10:59:24)


    4度30分钟,-20度1-2小时,-70度最长不超过3个月,每隔3个月复苏一次.
    建议最好在液氮罐保存,以确保细胞成活性.
  • shenkunjie (2012-7-27 11:00:05)


    太麻烦
    直接扔到负70
    倍儿好
  • tianmei001 (2012-7-27 11:00:22)


    不用液氮灌,可以用-70。我们是这样做的,将细胞转移至冻存管中,在-20放置半小时到一小时左右,预冻。之后放入-70中,我们尝试过载-70中放置1年的细胞没有问题,复苏之后状态尚佳。至于更长时间我们没有尝试过,但是老板说1年半没问题,在国外他试过。
    细胞冻遵循:慢冻速溶的原则。
  • 8964357 (2012-7-27 11:01:23)


    装在有正丙醇的冻存盒中可以直接放在-80度
  • 49888 (2012-7-27 11:01:43)


    4度半个小时,直接放入-70,效果也8错。
  • any333 (2012-7-27 11:02:06)

    装在有正丙醇的冻存盒中可以直接放在-80度

    ——————————————

    请问正丙醇起什么作用?
  • am10 (2012-7-27 11:02:36)


    拿毛巾包着冻存管就可以直接放进-70,即可以遵循细胞冻慢冻速溶的原则,又比较方便,不用先放-20,因为是慢慢冻进去的,所以能更好的达到梯度冻存
  • yysr238 (2012-7-27 11:03:03)

    请问正丙醇起什么作用?

    ————————————————————————————————————————————————————————————————

    應該是異丙醇才對.
    Nalgene有賣一種輔助細胞冷凍的產品"Mr. Frosty":
    http://www.nalgenelabware.com/pr ... p;subcategory_name=
    這個罐子裡面要加一些異丙醇,
    然後, 把細胞收集處理好裝在冷凍保存管中,
    再把冷凍保存管插在這個罐子內的洞(可放18根),
    最後全部放在-80度冰箱,
    因為異丙醇的關係, 罐內的溫度下降速度約為每分鐘1度,
    符合細胞冷凍過程需要慢速降溫的要求.
    所以放到隔天便可以將所有的冷凍保存管存放在液態氮中.
    這是個方便的東西,
    可買來試試.
  • dog002 (2012-7-27 11:03:38)


    你提供的网站上看不到价格,能告诉我价格以及代理商信息吗?
  • DDD (2012-7-27 11:03:58)


    -70度可以放一年。估计时间够你用了。
  • dog002 (2012-7-27 11:04:41)


    能保证一年的估计也就无限了我觉得
  • 66小飞侠 (2012-7-27 11:05:03)


    我这里没准备-70度冰箱呢,一般在-30度冰箱能存多久呢?
  • remenb (2012-7-27 11:05:26)


    -30 数小时吧,0度 到-60度都是细胞的危险温度,不能久放
  • fei1226com (2012-7-27 11:05:45)


    冻存细胞4度10分钟,-20度半小时, -80度过夜后放液氮或直接放-80度保存, 效果不错
  • xueyouzhang (2012-7-27 11:06:09)

    1. 选用对数生长期细胞,在收集细胞24小时前换液一次。
    2. 用常规方法将细胞消化下来,按(1~5)×106/ml浓度、悬浮于含有10% DMSO的小牛血清或生长液中。冻存的细胞数量要充分,因复苏时接种的细胞数量应比平常多一些。
    3. 用吸管吸取细胞悬液,分装于无菌安培管中(没管1ml),严密封口,放入三层纱布小袋,注明细胞名称和冻存时间,便于以后查找。
    4. 冻存 当前已有专用细胞冻存器,能精确地控制冻存温度。在无冻存器的情况下,可用手工方法。从把安培悬液在液氮容器口开始,在30~40min内,下降到液氮表面,在停30min后,直接投入液氮中。或先将安培移入液氮罐口颈部气相中过夜,次日将纱布袋缓慢下降至液氮中,历时3分钟。在液氮中可长期保存。 若没有液氮,可存于-80冰箱内,不过注意保存时间,比液氮短,可保存3个月左右
  • qqq111 (2012-7-27 11:06:29)


    呵呵,大家都是从书上看的吧。
    实际上,我认为eric2231 同志的慢冻速溶原则是正确的。
    慢冻是要给DMSO以渗透入细胞的时间,所以我的经验是4度的半小时要保证,之后就基本上可以马上冻起来也没有什么关系了。
    azhengyan01 同志的毛巾包裹法十分新颖,呵呵。不过,从原理上看,确实是值得尝试的好方法,既保证了时间,又省去了搬来搬去的麻烦。
    至于-80度的保存时间,我亲眼所见,半年绝对没有问题。
  • owanaka (2012-7-27 11:06:48)


    你没有液氮罐,在4度的情况下,要看你是什么细胞了,如果是老鼠的细胞可以放1小时左右,其他细胞最多半小时(本人做过试验的);在-20度的情况下,老鼠的可以放1天左右,其他细胞半天,但其状态不是很好了;在-70度的情况下,老鼠的细胞可以放1到2年,在此期间要复苏一次看其生长情况,其他细胞最多一年了,我也是自己摸索的,也请大家指导指导!
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