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【求助】DAPI染色或者Hochest33342染色技术
【求助】DAPI染色或者Hochest33342染色技术
我正在做DAPI染色或者Hochest33342染色,目的是观察转然后Hela细胞的核和染色质的变化。哪位高手作过或有经验请赐教! 我按程序操作后在显微镜下观察不到激发光,所以想知道什么样的显微镜可以满足这种要求。激发光:343nm,359nm,发射光:483nm, 461nm。
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最新回复
柒7 (2014-11-04 14:42:52)
哪位高手最好能提供一套实用的实验操作程序,这个技术是我实验的关键,一直无法突破,真是为伊消得人憔悴,我知道做细胞凋亡的朋友可能会用到这一技术! 我是按照细胞培养书上介绍的方法进行的,但在荧光显微镜下观察不到细胞和荧光。
tuomu45 (2014-11-04 14:43:18)
我做得很多 1 Hoechst是不是用ddH2O配的,不要用,否则会发生沉淀 2 终浓度:5umol/L,一般配成100X,染色10-15min,对细胞无明显毒性,荧光非常强。 浓度不要配错了。DAPI也是一样的,荧光更强更稳定 3 Hoechst染色可以直接在dish中操作(活细胞),也可固定后,DAPI则需先固定
柒7 (2014-11-04 14:43:37)
谢谢你,我将尝试着做。不知需要什么样特殊的显微镜来观察结果
vera+ (2014-11-04 14:45:09)
DAPI则需先固定 ???? 我们用活细胞也可以染色的呀
2541 (2014-11-04 14:45:41)
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请问你们的Hoechst是用什么配的,容易溶解吗?我用PBS配,不溶解。
ending (2014-11-04 14:45:59)
OLMPUS荧光显微镜,需配有相应光谱的激发滤片!
any333 (2014-11-04 14:46:21)
我在实验中也发现有沉淀,那用何溶液来配制没有沉淀呢?
leifengta (2014-11-04 14:47:55)
Hoeschst 用PBS配,浓度10uM,染色30秒即可观察
bojitu (2014-11-04 14:48:25)
QUOTE:
hoechst一定要用水配!用PBS会产生沉淀,尤其是高浓度时!常用的store液为100X或1000X
wanglaoshi (2014-11-04 14:49:17)
请问有谁知道流式细胞仪染液DAPI如何配制?
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