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碱性苦味酸法测定肌酐（一）
关键词：农兽药残留 环境标准样品 进口标准品 中检所标准品碱性苦味酸法测定肌酐（一）
【实验原理】
血浆或血清标本经除蛋白处理后，肌酐与碱性苦味酸发生Jaffé反应，生成橘红色的苦味酸肌酐复合物，在510～520nm波长附近测定吸光度。橘红色化合物的生成量与肌酐含量成正比，通过与同样处理的肌酐标准液比较，即可求出样品中肌酐含量。
【试剂与器材】
1．35mmol／L钨酸溶液
(1)100ml蒸馏水中，加入1g聚乙烯醇，适当加热助溶，勿煮沸，冷却备用。
(2)300ml蒸馏水中，加入11．1g钨酸钠(Na2WO4·2H2O，MW 329．81)，使完全溶解。
(3)300ml蒸馏水中，慢慢加入2．1m1浓硫酸，冷却。
于1L容量瓶中，将(1)液加入(2)液中，再与(3)液混匀，加蒸馏水至刻度，室温稳定
1年。
2．0．04mol／L苦味酸溶液 称取分析纯苦味酸(2，4，6，-三硝基苯酚，C6H3N3O7，MW229．11)9．32，溶于500ml 80℃蒸馏水中，冷却至室温，加蒸馏水至1L。以酚酞作指示剂，用0．1mol／I。氢氧化钠进行滴定。根据滴定结果，调苦味酸浓度至0．04mmol／I。，棕色瓶贮存。
3．0．75mol／L氢氧化钠溶液 称取分析纯氢氧化钠30g，加蒸馏水使其溶解，冷却后用蒸馏水定容至1L。
4．肌酐标准贮存液(10mmol／L) 称取肌酐(C4HiN30，Mw 113．12)113mg，用0．1mol、L盐酸溶解，并移入100ml容量瓶内，再用0．1mol／L盐酸定容至刻度。
5．肌酐标准应用液(10μmol／L) 取1ml肌酐标准贮存液，用0．1mol／L盐酸稀释至1000ml。
【操作步骤】
1．取血清(或血浆)0．5ml，加入35mmol／L钨酸溶液4．5m1，充分混匀，静置5分钟，3000r／min离心10分钟，取上清液进行检测。若为尿液标本，应用蒸馏水做1：200稀释。
2. 混匀后，置室温反应15分钟，以空白管调零，比色皿光径lcm，在510nm波长下读取各管吸光度。
【结果计算】
血液肌酐浓度（μmol/L）=测定管吸光度/标准管吸光度×100
尿肌酐（μmol/d）=测定管吸光度/标准管吸光度×10×200×24h尿量
【参考区间】
血肌酐浓度：男性44～133μmol／L；女性70～106μmol／L
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