谈一下个人总结破骨细胞的内容，仅供楼主参考：
１ 破骨细胞的发育来源
破骨细胞的发育来源较为明确，是造血干细胞分化为单核/巨噬细胞后在多种细胞因子 （TNF-a、RANKL、RANK、OPG、M-CSF、PGE2等）的调控下分化为成熟的具有多个细胞核的巨细胞 。
２ 破骨细胞的鉴定
破骨细胞呈特异性的抗酒石酸的酸性磷酸酶染色阳性（TRAP+），F-actin染色阳性，表达降钙素受体、组蛋白酶K（cathepsin-k）、整合素αvβ3（integrinsαvβ3），内可以分解骨组织，体外培养可以在骨片、象牙或者人工骨组织培养板上可以形成吸收性陷窝。
３附上几篇关于破骨细胞鉴定的较为权威具体的文献
（１） Chambers, T. J. Regulation of the differentiation and function of osteoclasts. J. Pathol, 2000; 192: 4–13
（２） Boyle, W.J., Simonet, W.S. & Lacey, D.L. Osteoclast differentiation and activation. Nature, 2003; 423: 337–342
（３）Udagawa, N. Takahashi N, Akatsu T,et al. Origin of osteoclasts: mature monocytes and macrophages are capable of differentiating into osteoclasts under a suitable microenvironment prepared by bone marrow-derived stromal cells. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 1990;87:7260–7264
（４） Lee SH, Rho J, Jeong D, et al. v-ATPase V0 subunit d2–deficient mice exhibit impaired osteoclast fusion and increased bone formation Nat Med. , 2006; 12:1403 - 1409
（５） Teitelbaum, S., L., and F. P. Ross. Genetic regulation of osteoclast developmentand function. Nat. Rev. Genet,2003;, 8: 638–649.
（６）Teitelbaum, S.L. Bone resorption by osteoclasts. Science,2000;289:1504–1508
４小鼠的破骨细胞TRAP+照片（×１００）
最新回复
雪原 (2015-7-11 17:31:10)
能看见是多核的吗？
18174162.snap.jpg
tudou85 (2015-7-11 17:31:29)
1.形态学观察 破骨细胞是一类多核、体积大的巨细胞，在相差倒置显微镜下观察容易识别。细胞直径达30～100μm，含几个至数十个核。培养2小时后胞浆伸展，形态清晰，呈油煎蛋形、长条形、漏斗形、不规则形等
2)TRAP染色反应 抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)为破骨细胞的特异性标志酶，应用偶氮偶联组化分析法酶活性部位显示红色反应。以萘酚二磷酸盐为底物，偶氮副品红为显色剂，TRAP在酒石酸钾钠存在条件下将萘酚AS-BI磷酸盐水解为萘酚AS-BI，与显色剂结合形成红色沉淀
3)TrATPase染色反应 抗酒石酸酸性三磷酸腺苷酶(TrATPase)与破骨细胞质子泵功能有关，是破骨细胞骨吸收微环境酸化，发挥骨吸收所必需的酶。应用镁激活铅染色法，以ATP二钠盐为底物，硫化铵为显色剂，形成PbS棕黑色颗粒阳性反应，分布在胞浆中
4)降钙素受体测定 破骨细胞及其前体含有丰富的降钙素受体，结合位点>106/细胞。降钙素受体只在定向破骨细胞前体及成熟破骨细胞中表达，因而是反映破骨细胞分化的特异性标志，并是与巨噬细胞多核体的鉴别指标。应用免疫细胞化学染色法，经ABC试剂反应和显色反应，呈橙黄色阳性反应，苏木精复染后核呈淡蓝色
5)骨片吸收陷窝观察 骨吸收陷窝形成是破骨细胞的特异性功能标志，应用薄牛骨片(10～50μm薄)培养破骨细胞，经3天培养，有活性的破骨细胞在骨片上形成明显的吸收陷窝，基底粗糙不平、边界清晰，呈圆形或不规则形
雪原 (2015-7-11 17:31:59)
对了
以上照片都是400倍的
14042777.snap.jpg
雪原 (2015-7-11 17:32:34)
多谢斑竹关照
55712497.snap.jpg
雪原 (2015-7-11 17:32:54)
上面的是瑞氏染色的片子
86822896.snap.jpg
雪原 (2015-7-11 17:33:11)
贴壁后的照片
51652739.snap.jpg
雪原 (2015-7-11 17:33:28)
感觉瑞氏染色的效果不好
有会做的高手帮忙指教一下
多谢了
57171612.snap.jpg
tianmei001 (2015-7-11 17:33:53)
大家帮看看最上面的是刚从呱股骨和胫骨骨腔分离出来的细胞,血细胞比较多,后面几张是贴壁的,尤其是瑞氏染色的,能否看见多核状态?第一次做,实在迷茫,无从下手,请大家多多指点!感激不尽了!
NBA (2015-7-11 17:34:21)
谈一下个人总结破骨细胞的内容，仅供楼主参考：
１ 破骨细胞的发育来源
破骨细胞的发育来源较为明确，是造血干细胞分化为单核/巨噬细胞后在多种细胞因子 （TNF-a、RANKL、RANK、OPG、M-CSF、PGE2等）的调控下分化为成熟的具有多个细胞核的巨细胞 。
２ 破骨细胞的鉴定
破骨细胞呈特异性的抗酒石酸的酸性磷酸酶染色阳性（TRAP+），F-actin染色阳性，表达降钙素受体、组蛋白酶K（cathepsin-k）、整合素αvβ3（integrinsαvβ3），内可以分解骨组织，体外培养可以在骨片、象牙或者人工骨组织培养板上可以形成吸收性陷窝。
３附上几篇关于破骨细胞鉴定的较为权威具体的文献
（１） Chambers, T. J. Regulation of the differentiation and function of osteoclasts. J. Pathol, 2000; 192: 4–13
（２） Boyle, W.J., Simonet, W.S. & Lacey, D.L. Osteoclast differentiation and activation. Nature, 2003; 423: 337–342
（３）Udagawa, N. Takahashi N, Akatsu T,et al. Origin of osteoclasts: mature monocytes and macrophages are capable of differentiating into osteoclasts under a suitable microenvironment prepared by bone marrow-derived stromal cells. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 1990;87:7260–7264
（４） Lee SH, Rho J, Jeong D, et al. v-ATPase V0 subunit d2–deficient mice exhibit impaired osteoclast fusion and increased bone formation Nat Med. , 2006; 12:1403 - 1409
（５） Teitelbaum, S., L., and F. P. Ross. Genetic regulation of osteoclast developmentand function. Nat. Rev. Genet,2003;, 8: 638–649.
（６）Teitelbaum, S.L. Bone resorption by osteoclasts. Science,2000;289:1504–1508
４小鼠的破骨细胞TRAP+照片（×１００）
88233009.snap.jpg
雪原 (2015-7-11 17:34:41)
谢谢回复！我用400倍的染色后看细胞都没有你的大，是不是我分离的不对？
那经过造血干细胞分化为破骨细胞，需要培养多少天？需要加1.25-二羟基维生素D3吗？
我还想问问，依您的经验来看，我的是吗？
babybabe (2015-7-11 17:35:06)
不知道楼上战友分离的是否是小鼠的破骨细胞，种属差异可能也是存在的。
个人诱导培养过破骨细胞，但是没有直接分离获得过破骨细胞，所以不敢妄下结论您获得的是否为破骨细胞。
具体的培养和鉴定方法在附上的文献内有详细的介绍。
好运！
雪原 (2015-7-11 17:35:29)
谢谢战友回帖。我分离的是大鼠破骨细胞，大概有2-3月龄。其实应该用乳鼠的，但是我是新手，借着师哥分离心脏后的大鼠就继续做了，不知道这样差异会不会很大。具体文献也看过，国内外也没有破骨细胞的纯分离培养。只是在形态学方面想请教一下大家。
雪原 (2015-7-11 17:35:48)
附上我的方法，请大家多多指点：
分离得到大鼠股骨，胫骨；刮净骨外膜及其他附着组织；于培养液中剪掉两端骨诟；用针头抽取培养液，然后冲洗骨腔；直至骨腔变白；将冲洗得到的悬液静置。吸取上层培养液于6孔培养板培养。24小时后吸取培养液以去除不贴壁悬浮细胞；更换培养液。3天后，吸取培养液80%继续培养。
2-3天时，细胞明显贴壁，且有长长的伪足出现。个别细胞还呈现空泡状，但在400倍倒置相差显微镜下看不到多核状。3天后，经瑞氏染色后，细胞多核状态不明显，上面有图。
我现在买不到薄牛骨片，无法进一步鉴定；各位大侠有相关经验，敬请赐教！Smile
雪原 (2015-7-11 17:36:21)
如果培养基里面不加1，25-（OH）2维生素D3，破骨细胞是不是就分化的晚？如果染色主要见到的是单核，但有伪足的细胞，那是不是破骨细胞前体？敬请赐教
quiqui008 (2015-7-11 17:36:44)
不必客气
我感觉感觉骨髓腔内的应该不是成纤维细胞
造成其他原代贴壁细胞污染的主要应该是上皮细胞
再说骨腔内应该是没有啥成纤维组织的
quiqui008 (2015-7-11 17:37:02)
雪原 (2015-7-11 17:37:31)
附上最新破骨细胞多核形态瑞氏染色图片，请高手帮忙鉴定。
43526812.snap.jpg
雪原 (2015-7-11 17:38:24)
关于TRAP染色鉴定，需要购买利副品红，AS-BI磷酸盐，请问哪里能购买到？普通试剂公司都没有这种药品。请大家帮忙！
33号 (2015-7-11 17:38:56)
QUOTE:
SIGMA 有全套试剂盒卖，也可以分开买试剂盒内的单种试剂，全套试剂盒大约１４００元。bring (2015-7-11 17:39:13)
那个骨片实验应该是必须做的．否则没有说服力，那个东西肯定没卖的，我见过的都是自己制作的. 似乎要求做的非常薄.
【求助】请高手鉴定破骨细胞