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【求助】毕赤酵母发酵上清液——脱色素？
毕赤酵母上罐发酵生产细胞外产物，得到了广泛的应用。我用无机培养基上罐发酵，得到的是黄绿色的发酵上清液，经过了分离柱的分离纯化，色素还是存在。【求助】毕赤酵母发酵上清液——脱色素？
色素成分有谁研究了解没？
请教下，色素怎么去除呢？？
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【求助】毕赤酵母发酵上清液——脱色素？
【求助】毕赤酵母发酵上清液——脱色素？
字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2016-3-07 16:46 作者: 水母 来源: 分析测试百科网
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woshituzhu (2016-3-07 16:46:25)
woshi (2016-3-07 16:47:14)
QUOTE:
活性炭品牌不同，孔径也不同，吸附的物质大小也不同，但是很多厂家都不在外包装上标明的。我曾经使用过几种活性炭来吸附我的粗酶液中的色素，但是效果都不算太好，酶活力会有损失。吸附时间久了，会把酶也吸附，我试过吸附10分钟和过夜的，结果过夜的酶损失稍大。
由于色素不重，所以加2%（W/V）处理，结果有一种活性炭可以去除一半色素，酶损失5%。由于活性炭也会占体积，所以如果用量太大，吸附的蛋白质会更多，所以别加太多。
由于活性炭不能经由离心完全去除，会造成OD600提高，所以从图中可以看出有的处理是OD600比原来酶液还高的。离心后用滤膜过滤，能把活性炭颗粒除去，OD600就会进一步下降。
我的对照为“原酶液不添加活性炭”，使用的活性炭分别为“粒状（天津市北长方正试剂厂，500g）”、“汕头市达濠精细化学品，500g”、“广东省台山市化工厂，500g，批号20080501”、“糖用活性炭”，如果你能买得到多个品种的活性炭，不妨也做一下我的这个实验。
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biabiade (2016-3-07 16:47:30)
nut6694 (2016-3-07 16:49:02)
join (2016-3-07 16:50:34)
QUOTE:
活性炭确实也吸附蛋白质的，但很多方法都会造成蛋白质的损失，另外，楼主说的是“细胞外产物”，不知道是蛋白质还是什么东西，要是分子量比较小，你的超滤就不起作用了。join (2016-3-07 16:51:24)
QUOTE:
你说的很有道理，不过我觉的楼主是在做蛋白表达，你再问问楼主是在做什么吧？水母 (2016-3-07 16:51:51)
然，听说先盐析结晶，看到说结晶的产物也是黑色的，估计效果也未必很好
话说，过柱除去，但困于对色素物质的全然不知，无从设计
水母 (2016-3-07 16:52:18)
QUOTE:
十分感谢，我的胞外表达是蛋白，超滤我试过，效果不好。主要是效率不高，耗时长，蛋白容易降解。。然，听说先盐析结晶，看到说结晶的产物也是黑色的，估计效果也未必很好
话说，过柱除去，但困于对色素物质的全然不知，无从设计
水母 (2016-3-07 16:52:34)
QUOTE:
十分感谢，我的胞外表达是蛋白，超滤我试过，效果不好。主要是效率不高，耗时长，蛋白容易降解。。然，听说先盐析结晶，看到说结晶的产物也是黑色的，估计效果也未必很好
话说，过柱除去，但困于对色素物质的全然不知，无从设计
求，之前探索过的先哲们，有什么赐教的
leifengta (2016-3-07 16:53:08)
shenkunjie (2016-3-07 16:53:25)
45778 (2016-3-07 16:53:52)
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活性炭品牌不同，孔径也不同，吸附的物质大小也不同，但是很多厂家都不在外包装上标明的。
我曾经使用过几种活性炭来吸附我的粗酶液中的色素，但是效果都不算太好，酶活力会有损失。吸附时间久了，会把酶也吸附，我试过吸附10分钟和过夜的，结果过夜的酶损失稍大。
由于色素不重，所以加2%（W/V）处理，结果有一种活性炭可以去除一半色素，酶损失5%。由于活性炭也会占体积，所以如果用量太大，吸附的蛋白质会更多，所以别加太多。
由于活性炭不能经由离心完全去除，会造成OD600提高，所以从图中可以看出有的处理是OD600比原来酶液还高的。离心后用滤膜过滤，能把活性炭颗粒除去，OD600就会进一步下降。
我的对照为“原酶液不添加活性炭”，使用的活性炭分别为“粒状（天津市北长方正试剂厂，500g）”、“汕头市达濠精细化学品，500g”、“广东省台山市化工厂，500g，批号20080501”、“糖用活性炭”，如果你能买得到多个品种的活性炭，不妨也做一下我的这个实验。
45778 (2016-3-07 16:54:27)
我曾经使用过几种活性炭来吸附我的粗酶液中的色素，但是效果都不算太好，酶活力会有损失。吸附时间久了，会把酶也吸 ...
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关于用分子筛来去除色素，我觉得色素可以是无机物也可以是有机物，分子量可以从100到上万，所以不一定可以与酶分得开。我曾经用G75来纯化我的淀粉酶，结果发现淀粉酶不能与色素完全分开，说明粗酶液里含有多种色素，且分子量不一，大分子量的色素与淀粉酶不能分开，小分子量的可以分开。不知道楼主的色素种类和分子量，所以不知道如果用分子筛结果会如何，但楼主可以试一下。
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45778 (2016-3-07 16:55:29)
youyou99 (2016-3-07 16:56:49)
水母 (2016-3-07 16:57:07)
vtongli (2016-3-07 16:57:49)
但沉淀+多步层析一般可以解决问题
qqq111 (2016-3-07 16:58:04)
TNT (2016-3-07 16:59:05)
毕赤酵母上罐发酵生产细胞外产物，得到了广泛的应用。我用无机培养基上罐发酵，得到的是黄绿色的发酵上清液，经过了分离柱的分离纯化，色素还是存在。
色素成分有谁研究了解没？
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对于我的淀粉酶来说，第一步如果用疏水层析可以去除绝大部分的色素。
粗酶液经过2M硫酸铵处理4℃静置过夜，8000RPM离心去沉淀，上清液的pH值调节为4.0于4℃静置过夜，8000RPM离心去沉淀，上清液的pH值调节为6.5，依次用0.45μm和0.22μm滤膜过滤，用HiPrep Phenyl cv=20ml进行蛋白质分离（程序为20mM磷酸钠缓冲液、2M硫酸铵、20cv、0-100%B、流速5ml/min）（图1）。
由于样品多达200ml，所以穿透液较多，每管为15ml，而洗脱液为每管5ml。测定各管OD600表示颜色深浅（图3），将淀粉酶所在的收集管（淀粉酶在洗脱液中的分布图2）合并后也测定OD600，结果以原酶液作为100%，则穿透液占51.71%，其它洗脱液占32.14，淀粉酶所在的洗脱液占13.39，可见能去掉绝大部分的色素（图4）。
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TNT (2016-3-07 16:59:42)
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