【求助】总RNA电泳18s比28s亮很多是什么原因？

字体: 小中大 | 打印发表于: 2016-4-04 21:41 作者: IAM007 来源: 分析测试百科网

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【求助】总RNA电泳18s比28s亮很多是什么原因？

我这两天抽提的总RNA 凝胶电泳总是18s的亮度超过28s很多，28s跟5s的亮度一样甚至还要暗。
请教高手，这是不是降解啊？
我印象中的降解是5s条带变亮，但是28s不会明显比18s暗啊。这种情形第一次碰到。请高手帮忙指点！不甚感激！

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最新回复

ha111 (2016-4-04 21:44:14)

个人认为是加样量多了，还有溶解时间短了，跑胶时间短了些，不知道，你的上述时间是多少？
IAM007 (2016-4-04 21:44:57)

谢谢LS！
这个样本的浓度是32，A260/A280为1.732，加样量1ul，100V，跑了30分钟。因为没有加Marker，可能不大好对比。
我以前跑胶的量多得多，电压时间也是这样，可是不是这样的结果。
下面我以前的结果，都是这样的。

18863238.jpg
dmg (2016-4-04 21:46:07)

楼主，你以前的电泳时变性电泳，效果很好啊！怎么跑出的？
hulu呼噜 (2016-4-04 21:46:24)

个人感觉应该是降解了吧，就像下边的那张电泳图，好的电泳图28s应该比18s要亮的多。
ilovegaga (2016-4-04 21:46:47)

可以肯定的说RNA 发生了降解.我开始提RNA 时也是这个样子.
IAM007 (2016-4-04 21:47:14)

QUOTE:
原帖由 dmg 于 2016-4-4 21:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

楼主，你以前的电泳时变性电泳，效果很好啊！怎么跑出的？
我跑的不是变性胶，就是普通的凝胶，0.8％浓度的，100V跑二、三十分钟左右，呵呵！
以前都是抽提细胞株的总RNA，量多，降解了一部分还剩很多，不怕！
现在抽提的是临床骨髓标本的总RNA，细胞少了，问题也多了！
IAM007 (2016-4-04 21:47:39)

QUOTE:
原帖由 ilovegaga 于 2016-4-4 21:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
可以肯定的说RNA 发生了降解.我开始提RNA 时也是这个样子.
那你后来是怎么样改进的啊？请教哦！
dog002 (2016-4-04 21:48:02)

我以前提取RNA的时候,Trizol试剂还没有很好的市场, 我们那个时候是用自己配制的试剂提取的, 浪费了很多很很的时间, 结果都不很理想.你要想得到好的结果,首先要弄清楚RNA 提取所要注意的事项, 另外还需要一定的经验. 总之我个人认为除了所用器具和试剂符合要求外,环境也是一个非常值得注意的地方.
yhtfyl (2023-2-24 08:27:55)

感谢楼主分享，受教了