【求助】A260/230的值偏低如何解决

最新回复

• remenb (2015-7-03 11:00:17)

  
  你好，请问你的问题解决了吗？我提取得RNA230一直都出不来，显示的是6个+，很郁闷，并且我p不出内参来。

• xue258 (2015-7-03 11:00:49)

  我用手工提取dna，但是也是260/230的值不太好，同一批提取的样品，又的值很小，有的1.7多，不知道改怎么去掉这些小分子的影响

• zhezhe (2015-7-03 11:01:07)

  
  260/230的值偏低是什么原因，如何解决？谢谢！

• 04906 (2015-7-03 11:01:39)

  
  260nm、230nm、下的吸光度分别代表了核酸、盐浓度的吸光度值,OD260/OD230<2说明去盐不充分,可以再次沉淀和70%乙醇洗涤。
  还有就是少量异硫氰酸胍残留会使 OD230 变大，但 OD260，OD280 几乎不变，OD260/230 大大低于 2。

• eor (2015-7-03 11:02:01)

  
  同意楼上所说。
  260/230比值偏小，是有盐污染，我们实验室解决的办法是：
  在乙醇洗脱步骤时：
  1、75％乙醇，4℃，7500g/min，离心5min；
  2、倒掉乙醇，再加入75％乙醇，条件同上，做第二次洗脱（注意，这次EP管在离心机
  里的摆放方向与第一次相反，以便能更全面的洗脱）；
  3、再次掉转EP管在离心机中的方向（不再加入乙醇），7500g/min，4℃，离心3min
  后，用200μl的枪小心吸去乙醇（注意不要吸到管底的RNA），然后开盖晾干乙醇即
  可。
  这样做后，比只用乙醇洗一次的效果要好很多，我们所提RNA用nanodrop测得260/230
  值均在2.0左右。
  以上是我们的一点经验，希望对楼主有用。

• DCS (2015-7-03 11:02:46)

  
  我再多洗一次不是更干净?

• bs4665 (2015-7-03 11:03:07)

  
  260/230从来没超过2.0的人飘过，基本1-1.5左右。
  可以试着多用75%酒精洗一次，2005的方法很好，学习了。

• 33号 (2015-7-03 11:03:30)

  
  我提取的也是这样，不过我用75%酒精洗两次，结果还是很低，不知道还有没有解决办法〉是不是我用的血细胞抗凝剂的问题？

• milkdog (2015-7-03 11:03:48)

  
  我也遇到类似情况，用的是QIAamp® RNA Blood Mini kit提取人外周血里的RNA，现在OD260/280都很好，在1.8-2.0，但是OD260/230极低，而且提取的浓度也很不好，不知道什么原因。。。。。。。。

• xevin (2015-7-03 11:04:05)

  楼主的问题得到解决了吗，我们用的也是天根的微量RNA提取试剂盒，也是260/230比值比较低，260/280还正常

• gmjghh (2015-7-03 11:05:55)

  
  用酒精洗涤的步骤，离心完后吸干净酒精。

• txwuyan (2015-7-03 11:06:21)

  楼主的问题得到解决了吗，我们用的也是天根的微量RNA提取试剂盒，也是260/230比值比较低，260/280还正常
  
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  同样的问题，请问解决了吗？是否会影响下一部RT-PCR呢

• caihong (2015-7-03 11:06:43)

  
  我测的A260/280在1.2~1.98之间，A260/230只有0.4~0.99之间。但是我接着跑了RNA电泳，都有28S和18S条带，我就做了PCR，CP值在14~30。不知道所谓的蛋白污染或者盐污染会不会影响结果，我的结果可以用吗？

• yayya (2015-7-03 11:06:59)

  
  我测的A260/280在1.2~1.98之间，A260/230只有0.4~0.99之间。但是我接着跑了RNA电泳，都有28S和18S条带，我就做了PCR，CP值在14~30。不知道所谓的蛋白污染或者盐污染会不会影响结果，我的结果可以用吗？

• H2O (2015-7-03 11:07:15)

  
  大家好！我用QIAGEN的试剂盒提，260/280都在1.5左右，260/280更低，几乎没有上1.0的，请问该如何解决呢？最后用80%酒精洗2次可以吗？还是血清拿来应该在16000g离心一段时间呢？谢谢！

• vcve (2015-7-03 11:07:38)

  
  我最近一直在提DNA，因为是粪样，所以污染物也多，以前一直以为260/230低是因为污染物没去除干净，又用了硅珠吸附，可是260/230反而更低了。
  最后才发现……是乙醇没有吸干净，没有完全风干，因为硅珠是固体，乙醇存在硅珠的缝隙里所以造成230高。
  我的解决方法是，最后一次用乙醇洗涤的时候，16000离心久一点，让DNA贴在管壁上，方便把乙醇吸干净，然后开盖放在离心管盒里，蒙上一层灭菌用的牛皮纸，放在37度烘箱里烘干5分钟左右，效果拔群。从此260/230都在2.0以上。