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【求助】SDS电泳胶不凝
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发表于: 2014-5-20 13:28 作者: 云端ing 来源: 分析测试百科网
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【求助】SDS电泳胶不凝
近来要做SDS了,结果药品配完后不凝,试着放到37度里了,还是不凝,***各位大侠了
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【求助】SDS电泳胶不凝
我也来说两句
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最新回复
ritou1985
(2014-5-20 13:28:46)
如果你的配方是正确的话,那就是哪个试剂失效了。
只有可能凝得快慢的情况,不可能不凝的。
zranqi_1
(2014-5-20 13:29:02)
楼主再好好做一遍试试,我刚做时也有过这样的情况,后来发现是弄昏了头,东西的比例都不对了。
假如不是这方面的问题的话估计就是试剂的问题了吧,是不是没配好或着放时间太常了?
eve_49
(2014-5-20 13:29:25)
我也遇到过胶不凝的情况,在当前的室温下,我一般是等20分钟左右才可以凝,分离胶、浓缩胶都多等一会儿
49888
(2014-5-20 13:29:50)
聚丙烯酰胺凝结主要是光反应,热反应是其次。天冷了,光线也少了,在你灌完胶后,你可以拿个白炽灯照射,也可以适当的增大APP和TEMED的量,就可以了,
BOSS2011
(2014-5-20 13:30:06)
我觉得你的胶不凝的原因有如下几点:1.丙稀酰铵和甲叉双丙稀酰铵的比例是不是不对;2.过硫酸铵有没有失效;3.放置时间是不是太短,天冷时,凝固的时间较长;4.分离胶加完后有没有封闭,如果不封闭就很长时间都不凝。这是本人的一点建议,希望能对你有所帮助。
蒲公英
(2014-5-20 13:30:23)
如果丙稀酰铵和甲叉双丙稀酰铵的比例和TEMED的量适当的话,要考虑过硫酸铵一定要现配现用!因师妹也有类似的现象发生过.
IAM007
(2014-5-20 13:30:57)
boss2011回答的较全面,做点补充检查过硫酸铵有无过期,可以取1.5ML离心管加入1ML水+0.1~0.2g AP立即放在耳边,听听有无发出咔嚓、喀嚓的声音,有则AP没过期,没有则过期。AP保存得好能用很久的。
vvmmoy
(2014-5-20 13:31:16)
minriver验证AP过期没有的方法很奇特,不知其原理是什么?
JK.jon
(2014-5-20 13:31:36)
多加点TEMED
DNA
(2014-5-20 13:31:58)
APP和TEMED量或是活性,最好新配
qqq111
(2014-5-20 13:32:15)
我们前一阵子也遇到类似情况,你们实验室如果其他人也做胶的话,可以先借点他们的TEMED和APS试试,逐一排除原因,一般都是这两种催化剂的问题。建议TEMED和APS量最好按方案加,过量虽然凝得快,但可能导致胶的不均匀凝固,影响电泳结果。
yychen
(2014-5-20 13:32:31)
一般胶不凝,过硫酸铵的问题最常见,过硫酸铵一定要新鲜配制,不能偷懒,之前配的最多能在4度放一周,我为了保险,每次都是新配。
wawa
(2014-5-20 13:32:52)
变性电泳胶不凝,首先最可能的原因就是过硫酸铵和TEMED试剂的问题,楼主应先排除这两个试剂是否出了问题,过硫酸铵一般受潮即失效,每次做电泳最好新鲜配置。
其次聚合时间与温度是有一定关系的,凝胶形成的反应过程中,需要有催化剂参加,催化剂包括引发剂过硫酸铵和加速剂TEMED,在温度低的情况下,可以适当加大以上两种物质的用量。另外还可以采用提高室温,预热配胶溶液等方法来加速胶的凝结。我们实验室的一位老专家建议采用增加光照的方法,就是用灯来照射装好胶的玻璃片效果也不错。
我曾经试过用吹风机加热,也能加速胶的凝结,不过这种方法不可取,会把胶面吹歪。
小糖块
(2014-5-20 13:33:15)
其实最主要的是怕AP失效,因为一旦潮解,就很难起作用。。。
popo520
(2014-5-20 13:33:33)
AP响也不一定能凝
能凝也不一定能凝匀。。。
总之很麻烦
师兄交代要用玻璃器皿配AP
试用有效后可分装成小份存在-20度
每次化一支 4度 一周内使用
tangxin_80
(2014-5-20 13:33:53)
排除法解决问题,如果方便的话,可以借用别人的(好用的),APS和丙烯酰胺,其余的用自己的,不凝的话,那就三种(包括temed)都借用别人的(哈哈,过分了啊,),还不凝的话,那就建议缓冲体系重新配,或者劳驾高手配,哈哈,要是这些都解决了,还是不凝的话,不过这个怎么可能呢!!!
抓紧,不要在凝胶这个问题上浪费太多时间!因为后面还有的忙。呵呵
orangecake
(2014-5-20 13:34:17)
TEMED还是不要多加的好,真的容易导致胶不均匀。可采用增加光照的方法,加热要注意胶上下温度一致的问题,我猜测还是可能你的APS出问题了。总的说来胶还是很好凝的,慢慢来,不要着急不要着急呵呵
toy
(2014-5-20 13:34:36)
请问楼主,你的问题现在解决了吗?找到了什么原因?我目前也遇到了同样的问题,一个星期了,一直徘徊在胶不凝上,到现在还没有找到原因。我的过硫酸氨是九三年买的,有部分潮解,但以前用的时候还可以,只是最近胶总不凝。temed是新买的,应该没有问题。所有的试剂都是用高纯水配制的。
再问一下各路高手,配试剂的水必须是双蒸水吗?我用的过滤器过滤的水,以前也是用这个,成功过,但现在我实在没有办法了。
谢谢了!
8princess8
(2014-5-20 13:34:58)
我觉得可能是Ap的问题
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【求助】SDS电泳胶不凝
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ritou1985 (2014-5-20 13:28:46)
如果你的配方是正确的话,那就是哪个试剂失效了。
只有可能凝得快慢的情况,不可能不凝的。
zranqi_1 (2014-5-20 13:29:02)
楼主再好好做一遍试试,我刚做时也有过这样的情况,后来发现是弄昏了头,东西的比例都不对了。
假如不是这方面的问题的话估计就是试剂的问题了吧,是不是没配好或着放时间太常了?
eve_49 (2014-5-20 13:29:25)
我也遇到过胶不凝的情况,在当前的室温下,我一般是等20分钟左右才可以凝,分离胶、浓缩胶都多等一会儿
49888 (2014-5-20 13:29:50)
聚丙烯酰胺凝结主要是光反应,热反应是其次。天冷了,光线也少了,在你灌完胶后,你可以拿个白炽灯照射,也可以适当的增大APP和TEMED的量,就可以了,
BOSS2011 (2014-5-20 13:30:06)
我觉得你的胶不凝的原因有如下几点:1.丙稀酰铵和甲叉双丙稀酰铵的比例是不是不对;2.过硫酸铵有没有失效;3.放置时间是不是太短,天冷时,凝固的时间较长;4.分离胶加完后有没有封闭,如果不封闭就很长时间都不凝。这是本人的一点建议,希望能对你有所帮助。
蒲公英 (2014-5-20 13:30:23)
如果丙稀酰铵和甲叉双丙稀酰铵的比例和TEMED的量适当的话,要考虑过硫酸铵一定要现配现用!因师妹也有类似的现象发生过.
IAM007 (2014-5-20 13:30:57)
boss2011回答的较全面,做点补充检查过硫酸铵有无过期,可以取1.5ML离心管加入1ML水+0.1~0.2g AP立即放在耳边,听听有无发出咔嚓、喀嚓的声音,有则AP没过期,没有则过期。AP保存得好能用很久的。
vvmmoy (2014-5-20 13:31:16)
minriver验证AP过期没有的方法很奇特,不知其原理是什么?
JK.jon (2014-5-20 13:31:36)
多加点TEMED
DNA (2014-5-20 13:31:58)
APP和TEMED量或是活性,最好新配
qqq111 (2014-5-20 13:32:15)
我们前一阵子也遇到类似情况,你们实验室如果其他人也做胶的话,可以先借点他们的TEMED和APS试试,逐一排除原因,一般都是这两种催化剂的问题。建议TEMED和APS量最好按方案加,过量虽然凝得快,但可能导致胶的不均匀凝固,影响电泳结果。
yychen (2014-5-20 13:32:31)
wawa (2014-5-20 13:32:52)
变性电泳胶不凝,首先最可能的原因就是过硫酸铵和TEMED试剂的问题,楼主应先排除这两个试剂是否出了问题,过硫酸铵一般受潮即失效,每次做电泳最好新鲜配置。
其次聚合时间与温度是有一定关系的,凝胶形成的反应过程中,需要有催化剂参加,催化剂包括引发剂过硫酸铵和加速剂TEMED,在温度低的情况下,可以适当加大以上两种物质的用量。另外还可以采用提高室温,预热配胶溶液等方法来加速胶的凝结。我们实验室的一位老专家建议采用增加光照的方法,就是用灯来照射装好胶的玻璃片效果也不错。
我曾经试过用吹风机加热,也能加速胶的凝结,不过这种方法不可取,会把胶面吹歪。
小糖块 (2014-5-20 13:33:15)
其实最主要的是怕AP失效,因为一旦潮解,就很难起作用。。。
popo520 (2014-5-20 13:33:33)
AP响也不一定能凝
能凝也不一定能凝匀。。。
总之很麻烦
师兄交代要用玻璃器皿配AP
试用有效后可分装成小份存在-20度
每次化一支 4度 一周内使用
tangxin_80 (2014-5-20 13:33:53)
排除法解决问题,如果方便的话,可以借用别人的(好用的),APS和丙烯酰胺,其余的用自己的,不凝的话,那就三种(包括temed)都借用别人的(哈哈,过分了啊,),还不凝的话,那就建议缓冲体系重新配,或者劳驾高手配,哈哈,要是这些都解决了,还是不凝的话,不过这个怎么可能呢!!!
抓紧,不要在凝胶这个问题上浪费太多时间!因为后面还有的忙。呵呵
orangecake (2014-5-20 13:34:17)
toy (2014-5-20 13:34:36)
请问楼主,你的问题现在解决了吗?找到了什么原因?我目前也遇到了同样的问题,一个星期了,一直徘徊在胶不凝上,到现在还没有找到原因。我的过硫酸氨是九三年买的,有部分潮解,但以前用的时候还可以,只是最近胶总不凝。temed是新买的,应该没有问题。所有的试剂都是用高纯水配制的。
再问一下各路高手,配试剂的水必须是双蒸水吗?我用的过滤器过滤的水,以前也是用这个,成功过,但现在我实在没有办法了。
谢谢了!
8princess8 (2014-5-20 13:34:58)
我觉得可能是Ap的问题
【求助】SDS电泳胶不凝