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LC-MS技术临床应用培训班报告（一）

2016.4.20

　　分析测试百科网讯2016年4月20日，液相色谱-质谱（LC-MS）技术临床应用培训班在上海中山医院举办。复旦大学附属中山医院检验科主任潘柏申教授、纽约州罗彻斯特大学临床质谱实验室主任兼北美华人临床化学学会（NACCCA）主席张岩教授、南卡罗来纳州医学院临床化学和毒理学主任兼北美华人临床化学学会（NACCCA）前任主席朱玉胜教授和克利夫兰医疗中心临床生化主任及医学总监王思合教授等多名液相色谱-质谱领域专家带来了精彩的报告。液相色谱-质谱和临床应用方面近百名专家学者共聚一堂，共同探讨LC-MS在医学检验中的应用。

复旦大学附属中山医院检验科主任潘柏申

　　潘柏申：复旦大学附属中山医院检验科主任，中华医学会检验医学分会主任委员，国家卫生标准委员会临床检验标准专业委员会副主任委员。

培训班现场

纽约州罗彻斯特大学临床质谱实验室主任兼北美华人临床化学学会（NACCCA）主席张岩

　　张岩：纽约州罗彻斯特大学临床质谱实验室主任，病理和临床医学系副教授，美国临床化学学会（AACC）质谱和分离分委会主席，北美华人临床化学学会（NACCCA）主席。

　　纽约州罗彻斯特大学临床质谱实验室主任兼北美华人临床化学学会（NACCCA）主席张岩介绍了《液相色谱与液相色谱-质谱联用技术的基本构架及原理》。在液相色谱方面，张岩主要对液相色谱的组成及各个部件和液相分离等方面做了详细的分析。

　　在检测器方面，张岩介绍到了紫外检测器，她表示紫外检测器易于使用、相对于质谱较便宜，但缺点是量化所有的复合物，不能区分不同种类，如色氨酸和酪氨酸。质谱的出现填补了这一空白，质谱由于它的高特异性，在临床应用上获得了很多的关注。质谱由离子源、质量分析器和检测器三部分组成，其中离子源方式包括电喷雾电离、大气压化学电离和基质辅助激光解析电离等，质量分析器包括四极杆、飞行时间和轨道离子阱等。张岩表示三重四极杆是最常用的质谱仪，扫描方式包括全扫描、单扫描、子离子扫描、母离子扫描、中性粒子丢失和MRM-多反应监测等。在维生素D的检测中，一般采用MRM方式，

南卡罗来纳州医学院临床化学和毒理学主任朱玉胜

　　朱玉胜：南卡罗来纳州医学院临床化学和毒理学主任，临床生物化学国家科学院（NACB）成员，美国临床化学学会（AACC）质谱和分离分委会成员，北美华人临床化学学会（NACCCA）前任主席。

　　南卡罗来纳州医学院临床化学和毒理学主任朱玉胜介绍了《液相色谱串联质谱技术（LC-MS/MS）基本操作》。液相色谱串联质谱的操作包括样品的制备、样品检测和结果报告三个步骤。样品的制备常规采取萃取技术，包括稀释进样、蛋白沉淀、液液萃取和固液萃取等，样品检测中液相色谱串联质谱通常采用缓冲溶液和有机相为流动相，通过脱气处理。做好标准曲线，确定内标物，进行质量控制。

　　朱玉胜介绍在结果报告前需检查质控、标准曲线、离子比例、内标、保留时间和峰形等。

　　朱玉胜还介绍了《液相色谱-串联质谱技术检测（LC-MS/MS）的仪器维护与故障排除》。

　　在HPLC方面的故障主要有，压力：太低（漏）或者太高（堵）；前后流速不一致：保留时间和梯度的偏移；管路：死体积过大，混匀的不完全等。

　　在MS方面的故障，朱玉胜介绍了如何解决质谱前端（转化区域）和MS-1的污染，导致通常会有信号逐渐丢失或者高的基线水平；气源供应或者排气管路中断会产生错误信息；加热器故障；电子故障；孔口的堵塞；离子源没有识别；管路没有连接在源上；质量校准或调试中的偏移；真空泄漏；老化的检测器导致敏感度的下降；信号突然丢失，或者错误信息，或者两者同时出现；信号逐渐丢失；MS/MS灵敏度的下降等问题。

　　另外，朱玉胜还建议一个批次/切换/一天结束后清洗柱和色谱系统；当LC关闭时，在室温环境下，让系统处于高百分比的有机相（咨询LC供应商；LC色谱柱的产品供应商）不要使用缓冲液或者酸。周/月/周期性使用维护，有机试剂来冲洗强的残留的，非极性的成分（磷脂和其他脂类）；电脑维护；管路修复（管路，配件，预滤器保护柱，色谱柱）；质谱源部件的改变（比如电极）；MS/MS的清洁需要排气（询问供应商）。

克利夫兰医疗中心临床生化主任及医学总监王思合

　　王思合：克利夫兰医疗中心临床生化主任及医学总监，美国临床化学学会（AACC）转化医学部门主席，临床化学鉴定委员会（ComACC）主席，北美华人临床化学学会（NACCCA）前任主席。

　　克利夫兰医疗中心临床生化主任及医学总监王思合介绍了《液相色谱-串联质谱技术（LC-MS/MS）在临床小分子定量检测中的应用》。

　　王思合表示LC-MS/MS在临床应用中可用于新生儿疾病筛查、先天性代谢缺陷、毒理学检测以及滥用药物检测、止痛药物的检测、治疗药物监测、内分泌物质和蛋白质鉴定以及定量检测等。相比与免疫学方法，LC-MS/MS在定量检测患者样品中的小分子物质具有明显的优势：具有高特异性、高灵敏度（<1pg/ml）、适用范围广泛、检测的灵活性和检测信息丰富。但是运用LC-MS/MS也面临着挑战，如掌握起来比较困难、需要自建系统、检测通量受条件的限制（分析周期、样品前处理、批量分析和与实验室信息系统的接口）、没有强大的服务支持等。

　　王思合介绍到维生素D营养状态评测实验，LC-MS/MS检测血清中25(OH)D，使用乙腈沉淀蛋白，梯度洗脱，在正离子模式下，检测到25(OH)D3,401.3-383.2m/z, 25(OH)D2,413.3-395.0m/z, d6-25(OH)D3,407.3-389.2m/z。

　　王思合表示LC-MS/MS在临床实验室的应用前景还有很多，比如：自动化前处理（条码阅读器和非人工提取）；减少试剂消耗，低流量LC与MS联用，提高敏感性与检测速率；减少录入错误，将样品前处理、LC-MS/MS和LIS连接起来；改善实验室间检测结果的互通性、日常稳定性优化及繁重的维护工作；改善使用者的体验；减少故障停机时间，改善检测的有效性。

　　王思合还介绍了《实验室质谱检测的人员与设备要求》。他介绍了CLIA’88（临床实验室改进修正案）条例，CLIA’88主宰了临床实验室对于人员的特殊要求。

　　在临床质谱实验室中的工作人员需要特殊的教育和培训，王思合还介绍了实验室主任的资格及职责，技术主管的资格及职责，临床顾问的资格及职责，总主管的资格及职责，检测人员的资格及职责和团队合作精神的重要性。

　　设备方面，王思合表示设备需要充足空气流通的空间-严格的湿度和温度控制；充足和稳定的电力供应；提供最小震动的稳定的工作台面；用于制备校准品分析仪器等；冰箱和用于样本和标准品的储存冷藏空间；样本制备时使用的化学安全头罩；有机试剂的储存；废弃物管理；质谱产生的有毒物质处理机制；有效的MS产生噪音的降低。