赛默飞世尔科技CPSA 2013报告集锦
2013年4月24日，第四届CPSA上海年会在上海淳大万丽酒店举行。来自国际知名药企、跨国大制药公司、生物医药研究所和高校的高管、专家、学者百余人参加了本次会议。赛默飞世尔科技作为金牌赞助商参加会议，并围绕其在生物医药领域的创新技术给与会者带来了多场精彩报告。
赛默飞世尔科技展台
4月25日，CPSA 2013大会开幕式当天中午赛默飞举行了午餐技术交流会。午餐会期间，来自赛默飞世尔科技应用工程师刘绿叶先生带来了题为《药物分析应用领域中质谱高效前端技术》的精彩报告。
赛默飞午餐研讨会现场
赛默飞世尔科技应用工程师 刘绿叶先生
报告中，刘绿叶先生主要讲了三部分内容：DGPLC MSMS液相色谱质谱联用仪介绍，采用DGPLC MSMS阀切换技术分析药物中的有关物质以及采用DGPLC MSMS外接抑制器分析蛋白和多肽类化合物。
刘先生首先介绍了Ulitimate3000双三元多功能液相色谱与TSQ Vantage 三重四级杆质谱仪。TSQ Vantage是最灵敏的三重四级杆质谱仪，因为有更多加热的氮气作为辅助气流，增强了高流量下的脱溶剂效果；真空锁定技术，维护方便且离子迁移效率最大，从而得到了更高的灵敏度。采用TSQ Vantage柱切换技术可以分析药物中的有关物质。人用药品注册技术要求国际协调会议要求表观含量大于0.1%的杂质就需要进行定性分析，使用TSQ Vantage分析条件简单且灵敏度高，方便操作。
CSRS抑制器是一种常用于离子色谱中降低淋洗液背景电导的装置，中间含有一层强阴离子交换膜，这样，淋洗液中的强酸透过膜被再生液中和生成弱酸，再生液形成盐 。刘先生还介绍了TSQ Vantage外接抑制器来分析蛋白和多肽类化合物的解决方案。采用TFA-Fix技术或柱后抑制器抑制技术，总体的优势体现在TFA-Fix技术分析室，部分多肽提高1.00-1.77倍响应值；柱后抑制器抑制技术分析时，平均提高5倍，部分多肽提高17倍响应值；DGLC系统全自动实现质谱前段的TFA-Fix技术和柱后抑制器抑制技术，保证LC与MS的完美联用。
此外，赛默飞在生物分析技术发展和目标蛋白质组学分会场也有多场报告。
赛默飞世尔科技 江峥女士
来自赛默飞世尔科技的江峥女士在生物分析技术发展分会场中介绍了题为《使用精确质量数实现生物制剂中低检出限的激素定量》的报告。
江峥女士从萃取离子色谱(EIC)图、采集模式、开发方法、特异性等多个方面比较了HiRes质谱和三重四极杆质谱在定量分析中的差异。HiRes质谱采用MS/MS2的全扫描模式，可以分析质量范围内所有的共流出化合物，不需要SRM优化，能够分离共流出物的等压干扰，应用范围包括目标化合物定量、目标或非目标化合物的筛选和确认、同时定量/定性分析。而QqQ质谱采用MRM/SRM模式，只能检测一定数量的化合物，有来自基质的潜在干扰，使用范围包括目标化合物的筛选和定量。在定量工作流程中，HiRes质谱也比QqQ简单，HiRes质谱设置质量范围和分辨率之后，仪器可以自动进行数据采集、分析，直至得到报告。HiRes质谱使用HRAM创新技术，节省分析时间；可同时进行定量/定性分析。生物分析时使用精确质量数主要有三大优点，第一，高分辨率下提供精确质量，确保分析的高特异性；第二，使用理论精确质荷比，需要较少的方法开发；第三，单一质谱平台可同时定量/定性分析。
随后江峥女士介绍了赛默飞的Orbitrap技术。Orbitrap质谱中采用了和离子阱或FT-ICR相似的技术。Q Exactive质谱仪于2011年ASMS推出，是首台推出市场的台式LC-MS/MS Orbitrap仪器。它被看做是Exactive 产品线基础上一个互补扩展，相比Exactive，Q Exactive 有更加灵敏的离子源，有更高的扫描速度。江峥女士以五种类固醇为例介绍了基于AM的定量方法的建立，并评价了精确定量的灵敏度、线性范围和重现性。实验证明，Q Exactive 串联高分辨率质谱分辨率达到140k@m/z 200，分析质量准确度<3ppm(外标)，维持稳定质量准确度的情况下快速极性转换，在血浆样品中的五种类固醇检测灵敏度达到pg/mL浓度级别。
赛默飞世尔科技 郝志奇女士
来自赛默飞世尔科技的郝志奇女士在蛋白质组学分会场中带来了题为《高分辨质谱分析目标蛋白质的独立数据方法》的精彩报告。
蛋白质从发现到目标物的定量有其一套完整的定量工作流程，而目前遇到的挑战就是如何保证复杂生物基质中更多蛋白质或多肽的重复、精确定量。SRM模式高背景噪音、选择性低、灵敏度低，不适于某些高电荷、高质量数的蛋白质。HRAM数据系统拥有高达140k的分辨率，<5ppm的质量准确度。Q Exactive的HR/AM目标物定量方法中包含平行反应监测(PRM)、SIM和数据独立采集DIA软件。郝志奇女士比较了DDA和DIA，结果显示，DIA方法具有以下优势：无需目标物列表，很高的通量(达到100s-1000s)，更少的方法开发，可以从旧数据中检索出新的目标物。但DIA同时也有一些局限性：由于干扰的背景离子，使得目标物采集方法灵敏度降低10倍，不能匹配快速UHPLC分离，必须要有一个参考的谱库。
在Q Exactive 上运行DIA实验有很多优势：通过减少干扰，采用高分辨率设计来获得更高精度的定量数据；可以灵活使用不同的质量范围和分辨率组合来适应不同的研究需求；实现MSX-DIA实验的唯一平台，比一般的DIA实验有更高的选择性。复杂样品中拥有更好的定量性能；创新的Easy-Spray离子源和Easy-Spray柱能够稳定多样品运行时肽信号强度和保留时间，以保证定量结果的重复性。
赛默飞世尔科技 聂爱英博士
来自赛默飞世尔科技的聂爱英博士在生物分析技术开发分会场带来题为《高分辨质谱表征抗体药物分子量、肽序列和修饰位点》的报告。主要介绍了抗体药物、Orbitrap质谱仪和Q Exactive分析抗体药物的分子量、肽序列和修饰位点三个方面的内容。
FDA和EMA已经证实的lgG抗体药物有纯抗体、放射免疫偶联、抗体药物共轭(ADCs)、特异性抗体、Fab片段、Fc-融合蛋白质/肽、免疫细胞因子等。聂爱英博士以单克隆抗体MAb为例介绍了赛默飞Orbitrap仪器抗体检测的方法和优势。单克隆抗体MAb分子量约150k Da，有2个轻链和2个重链，多个二硫键，由多种糖形的糖蛋白组成。MAb有多重修饰方式，可以脱酰胺、氧化、二硫化、序列截断、聚合等。目前在MAb开发工作流程涉及了药物发现、临床前开发、临床开发、商品化前后的整个过程。MAb分析包括产品滴度、纯度和杂质、产品ID、完整质量序列、电荷变化、碎片、修饰、DMPK/代谢物和聚糖等，传统的分析方法有SDS-PAGE、HPLC、免疫组化分光光度法。传统方法在选择性、特异性、灵敏度、线性范围、通量和稳定性中存在很多挑战。
Orbitrap成为MAb分析的一种突破性技术，其拥有高分辨率，可以达到140k FWHM@200 m/z和240k@400m/z；内标<1ppm和外标<2ppm的高精度；很好的正负极转换稳定性和高通量，一次进样获得更多信息；小于fmol的灵敏度。目前Orbitrap家族有落地式LTQ Orbitrap和台式Exactive两款产品。在售的LTQ Orbitrap系列有LTQ Orbitrap XL、LTQ Orbitrap Velos Pro、LTQ Orbitrap Elite。在售的Exactive系列有Exactive plus、Q Exactive。聂爱英博士详细介绍了Q Exactive定量分析MAb的工作流程和获得的原始MW、解卷积MW、ADC键位置、不同的PTM位点。使用Q Exactive可以获得大于95%的肽图谱信息。
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