查看完整版本请点击这里：
LKB法测定血清(浆)总胆固醇
关键词：生物成分分析标准物质 蔬菜农药残留检测 焦炭成分分析 药检所对照品LKB法测定血清(浆)总胆固醇
【实验原理】
该方法通过碱性溶液即KOH乙醇溶液迅速皂化脂蛋白内的胆固醇，使脂蛋白变性而析出胆固醇，经过碱性环境、中温和足够长的反应时间后，胆固醇酯完全水解为胆固醇和游离脂肪酸。再采用有机溶剂正己烷把胆固醇抽提出来，分离正己烷液，减压干燥得胆固醇结晶。胆固醇与Liebermann—Burchard试剂产生显色反应显现蓝绿色，显色深浅与胆固醇含量成正比。
【试剂与器材】
1．33%KOH水溶液 33g干燥KOH粉剂于50ml去离子水中溶解，待溶液冷却至室温后，加水补足体积至100ml，每月新鲜配制。
2．0．036mol／LKOH乙醇溶液 取33％KOH水溶液6ml，加入无水乙醇补足体积至100mL混匀封装于塑料瓶中备用，该试剂易变色，宜在临用前配制。
3．Liebermann-Burchard(L-B)试剂，即冰醋酸-浓硫酸-醋酸酐混合液
以上三种试剂均刺激性大、易挥发，应在毒气橱内隔着防护板，戴防护眼镜及外科手套操作：首先冰浴50ml三角烧瓶，向内注入10ml冰醋酸，再用吸管缓慢滴加lml浓硫酸，轻轻混匀，最后缓慢加入20ml醋酸酐，充分混匀。
4．胆固醇标准溶液。
5．17mmol／L贮存液 50mg胆固醇纯度标准物质置一敞口烧瓶中，于真空烘箱内55℃过夜，取出，并于水浴加热至55℃的25ml无水乙醇中溶解，混匀。密封干燥4℃保存。
6．胆固醇标准溶液应用液 分别取贮存液4ml、6ml、8ml于3只试管中，各管补足无水乙醇体积至10ml，配制成浓度为2．068mmol／L、3．102mmol／L、4．136mmol／L的胆固醇标准溶液应用液。应用液当天配制。
7．10ml带盖聚四氟乙烯离心管。
8．10ml玻璃试管。
9．仪器超速离心机和分光光度计。
【操作步骤】
紫外分光光度计比色：用空白管调零，620nm处比色，记录各管吸光度，以3只分管比色值的均数作该管的比色结果。
【结果计算】
测定管浓度=测定管吸光度/标准管吸光度×标准液浓度
该公式中测定管浓度指分析样本的胆固醇浓度，标准液浓度指胆固醇标准液的胆固醇浓度，测定管吸光度指分析样本的吸光度值，标准管吸光度指胆固醇标准液的吸光度值。
【注意事项】
1.L-B试剂，即冰醋酸-浓硫酸-醋酸酐混合液，三种试剂均刺激性强、易挥发，应在毒气橱内隔着防护板，戴防护眼镜及乳胶手套操作。
2.KOH乙醇溶液、胆固醇标准溶液应用液、L-B试剂均需要临时配制，L-B试剂配制后，要求在1小时内使用。
3．每管加正己烷后，必须盖紧试管盖颠倒混匀抽提，若管内有液体漏出，则放弃该笔不用。
4．正己烷抽提胆固醇的过程中，必须保证混合均匀，可采用旋涡混合器混合5～10分钟，或水平剧烈混匀15分钟。
第二节血清(浆)三酰甘油的测定
三酰甘油(triglyceride，TG)的测定可以分为化学法和酶法两大类。化学法采用有机溶剂从血清中抽提出三酰甘油，再经过皂化、氧化、显色反应进行测定。变色酸显色法是美国CDC推荐的TG检测的参考方法。化学法曾经是临床常规使用的TG测定方法，但目前已经基本被酶法取代，现在临床检验科常规使用的TG测定方法是酶法。
查看完整版本请点击这里：
LKB法测定血清(浆)总胆固醇
LKB法测定血清(浆)总胆固醇
LKB法测定血清(浆)总胆固醇