最新更新主题

【求助】原代培养，睾丸间质细胞不贴壁

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2015-2-25 14:51    作者: ququer787    来源: 分析测试百科网

查看完整版本请点击这里：
【求助】原代培养，睾丸间质细胞不贴壁

       恳请走过路过的大侠们帮忙看看，我的细胞为啥不贴壁！！
       我自认为操作没问题，做前紫外，开风机通风，DMEM/F12培养基，12％胎牛血清，双抗也加了，0.25％胶原酶消化。也铺过0.1％明胶，按说24小时就该贴壁，可我的直到第3或4天才贴. 我都过了半年了，急死了快，请大家帮分析下（前2张是第3天的，最后一张是刚消化好拿去培养的）
查看完整版本请点击这里：
【求助】原代培养，睾丸间质细胞不贴壁


3天后。.jpg


3天后.jpg


刚消化下来.jpg


我也来说两句 查看全部回复

最新回复

  • wiwi (2015-2-25 14:54:18)

    人的组织？

  • memory (2015-2-25 14:54:36)

    有没有加DMSO？

  • wood533 (2015-2-25 14:54:53)


    如果培养基的pH等都是正确的话，可以尝试加一些贴壁因子，如FBFβ等促进其贴壁。

  • ququer787 (2015-2-25 14:55:16)

    QUOTE:

    原帖由 wiwi 于 2015-2-25 14:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    人的组织？
    这是小鼠的，看文献上说的，很容易呀，但点背的我总是养不活。求帮助！！

  • ququer787 (2015-2-25 14:55:32)

    QUOTE:

    原帖由 wood533 于 2015-2-25 14:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

    如果培养基的pH等都是正确的话，可以尝试加一些贴壁因子，如FBFβ等促进其贴壁。
    请问FBF是什么东东？
    我用过0.1％明胶。还是不行。

  • ququer787 (2015-2-25 14:57:14)

    QUOTE:

    原帖由 memory 于 2015-2-25 14:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    有没有加DMSO？
    DMSO 不是冷冻时才需要吗？

  • jingling845 (2015-2-25 14:57:39)


    二甲亚砜是个很神奇的东西，具体你可以去查文献，我们老师讲的时候要求有一定浓度的二甲亚砜

  • caihong (2015-2-25 14:57:58)

    小鼠的比大鼠的难养一些。大部分都会死，很少会贴壁。养的时候可以将多个鼠的睾丸组织消化后的滤液合并到一起离心。在消化的时候千万不要弄断曲细精管。消化过程中最好不断的震荡。不要消化超过40分钟，消化到曲细精管散开但是不断裂就可以。另外小鼠的品系也有一定关系，c57比8bc的原代要好养一些。一般24小时就会贴壁，培养一代以后3beta-HSD鉴定一下就OK。

  • ququer787 (2015-2-25 14:58:20)

    QUOTE:

    原帖由 caihong 于 2015-2-25 14:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    小鼠的比大鼠的难养一些。大部分都会死，很少会贴壁。养的时候可以将多个鼠的睾丸组织消化后的滤液合并到一起离心。在消化的时候千万不要弄断曲细精管。消化过程中最好不断的震荡。不要消化超过40分钟，消化到曲细精管散 ...
    您好，看到您的回复我很激动，您真是专家级别的呀！！！我会按您说的改进下，非常感谢！！

    那个3β-HSD您用过吗？我现在已经买了
    NRT：硝基四氮唑蓝 。。。
    NAD：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸
    DMSO也有，只剩下那个DHEA：脱氢表雄酮，没买到，因为试剂公司说要三千多块钱，请问您用过吗？买的这个有这么贵吗？

  • sr9971 (2015-2-25 14:58:54)

    sigma的差不多是这个价格，买最小包装的吧，染色液配出来之后可以用很长时间的。每次的用量很小。

  • pulala (2015-2-25 14:59:13)

    培养基也可以改进一下，用M199培养基比F12好一些

  • ququer787 (2015-2-25 14:59:40)

    QUOTE:

    原帖由 pulala 于 2015-2-25 14:59 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    培养基也可以改进一下，用M199培养基比F12好一些
    可好多文献上用的都是DMEM/F12呀，好吧，我试试再，谢谢

  • ququer787 (2015-2-25 15:00:03)

    QUOTE:

    原帖由 sr9971 于 2015-2-25 14:58 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    sigma的差不多是这个价格，买最小包装的吧，染色液配出来之后可以用很长时间的。每次的用量很小。
    您自己用过这个，染色，是吧？

  • idea2011 (2015-2-25 15:01:19)

    培养基可以换着试一下，我们两个都用过，M199稍微好些。染液我自己配的用过，还算好用。
查看全部回复 我也来说两句
查看完整回复请点击这里：
【求助】原代培养，睾丸间质细胞不贴壁