【求助】cAMP ELISA 检测

字体: 小中大 | 打印发表于: 2015-2-25 15:02 作者: yjf1026 来源: 分析测试百科网

大家好，请教大家几个关于cAMP含量测定的问题哈！
首先，我要检测的对象是精子细胞；打算用的方法是ELISA；
我的问题：
1.cAMP应该是核苷酸衍生物，那么用ELISA进行检测的原理是什么呢？（不是抗原抗体反应吗？那抗原一般不应该是蛋白质吗？那cAMP是如何发生抗原抗体反应的呢？）
2.cAMP是细胞中的第二信使，产生也应该是在细胞中产生的，而且cAMP水解的速度远远大于生成的速度，那么细胞中的cAMP容易检测到吗？（对细胞处理有没有什么特殊要求呢？在进行ELISA检测之前该如何对精子细胞进行处理呢？）
先谢谢大家啦!

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【求助】cAMP ELISA 检测

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最新回复

chuntian1983 (2015-2-25 15:03:21)

cAMP水解速度是比较快，但是刺激细胞产生cAMP的同时还要加一种化学试剂抑制cAMP的水解，这样cAMP会在细胞内累积起来不会水解，我记不起来cAMP水解抑制剂了。有很多公司生产检测cAMP的试剂盒，但是价格不是一般的贵，一般一个96-well的试剂盒的价格是300美元，除去你要做标准曲线的孔，能用于测试样品的只有70个孔。很是烧钱。
idea2011 (2015-2-25 15:03:40)

1. Antibody can be prepared against cAMP and polysacchrides, not just protein.
2. During sample preparation, you do need to add inhibitor of cAMP phosphodiesterase, such as 3-Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX, a non-specific inhibitor of cAMP or cGMP phosphodiesterase).
3. ELISA is expensive and may not be sensitive, you can try radioimmunoassay.
jingling845 (2015-2-25 15:03:58)

已经很便宜了！
sistis (2015-2-25 15:04:15)

这是个烧钱的实验啊，二楼正解！
yjf1026 (2015-2-25 15:04:39)

QUOTE:
原帖由 chuntian1983 于 2015-2-25 15:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
cAMP水解速度是比较快，但是刺激细胞产生cAMP的同时还要加一种化学试剂抑制cAMP的水解，这样cAMP会在细胞内累积起来不会水解，我记不起来cAMP水解抑制剂了。有很多公司生产检测cAMP的试剂盒，但是价格不是一般的贵，一般一个96 ...
首先很感谢您的回复哈！
我是想检测获能后精子中cAMP含量的变化，可是看到你的回复后，我又有新的问题了，希望你能帮我分析一下啊：
我所用的精子来源是小鼠，经过HTF获能处理后就将所有收集的精子冻存到负80了，没有加你所说的水解抑制剂
那么我的问题是：我的这些样品是不是就不能进行ELISA检测了呢？
谢谢啊
yjf1026 (2015-2-25 15:05:19)

QUOTE:
原帖由 idea2011 于 2015-2-25 15:03 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

1. Antibody can be prepared against cAMP and polysacchrides, not just protein.
2. During sample preparation, you do need to add inhibitor of cAMP phosphodiesterase, such as 3-Isobutyl-1-methylxanthi ...
非常感谢你的帮助哈
我现在又遇到新的问题了，你帮我看看好吗：
我本想检测获能后精子中cAMP含量的变化，所用的精子来源是小鼠，经过HTF获能处理后就将所有收集的精子冻存到负80了，没有加cAMP水解抑制剂，看了大家的回复后，我感觉我的这批样品好像不能再检测cAMP含量了，对吗？不知道还有没有补救办法呢？
谢谢啊
TAT (2015-2-25 15:05:37)

如果是测量精子在自然条件下的cAMP含量，最好是采集之后立即测cAMP的含量。我做cAMP ELISA都是先用某种毒素处理细胞，同时加上“IBMX, a non-specific inhibitor of cAMP or cGMP phosphodiesterase”。然后裂解细胞，收集cAMP,然后用试剂盒检测cAMP 含量。
yjf1026 (2015-2-25 15:05:59)

QUOTE:
原帖由 TAT 于 2015-2-25 15:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

如果是测量精子在自然条件下的cAMP含量，最好是采集之后立即测cAMP的含量。我做cAMP ELISA都是先用某种毒素处理细胞，同时加上“IBMX, a non-specific inhibitor of cAMP or cGMP phosphodiesterase”。然后裂解细胞，收 ...
嗯，看来我的那批精子是不能再用来测cAMP了
还是非常感谢你的热心帮助哈！