【求助】用紫外吸收法测药物最小抑菌浓度(MIC)

我现在用试管稀释法做精油的MIC(最小抑菌浓度),无法目测浑浊度,老师建议用紫外吸收测细菌生长状况,可是我将菌液稀释至0.5麦比后在紫外上测吸光度从520nm到650nm都没有明显吸收。我不是做微生物的,请教一下这是怎么回事?

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最新回复

  • 555444 (2016-3-07 11:47:04)

    你的空白对照是什么,用什么来对光度计调零的?
  • vcve (2016-3-07 11:47:21)

    QUOTE:

    原帖由 555444 于 2016-3-7 11:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    你的空白对照是什么,用什么来对光度计调零的?
    是用肉汤培养基做对照调零的
  • 555444 (2016-3-07 11:47:38)

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    是用肉汤培养基做对照调零的
    对照组应和样品组一起在摇床培养,吸取菌液不用稀释直接测定就好
  • vcve (2016-3-07 11:48:01)

    QUOTE:

    原帖由 555444 于 2016-3-7 11:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

    对照组应和样品组一起在摇床培养,吸取菌液不用稀释直接测定就好
    不稀释会不会太浓了,我现在还没找到最大吸收波长是多少。菌液必须得摇床培养才行吗?
  • 555444 (2016-3-07 11:48:19)

    QUOTE:

    原帖由 vcve 于 2016-3-7 11:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

    不稀释会不会太浓了,我现在还没找到最大吸收波长是多少。菌液必须得摇床培养才行吗?
    不用摇床也可以的,你本来就是测定菌液的浓度,除非是浓度太浓超出了光度计量程,不然一般很少稀释,最大吸收峰你查下文献看别人的是多少
  • vcve (2016-3-07 11:49:04)

    QUOTE:

    原帖由 555444 于 2016-3-7 11:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

    不用摇床也可以的,你本来就是测定菌液的浓度,除非是浓度太浓超出了光度计量程,不然一般很少稀释,最大吸收峰你查下文献看别人的是多少
    文献中报道600nm、610nm还有一个是540nm,我认为就是测那个OD600。我只是做金葡和大肠杆菌,我将520-650nm波段都扫了没有吸收。我想用紫外吸收数值来支持我的药物的确抑菌并且找出最低抑菌浓度(MIC),需要做生长曲线吗?
  • 555444 (2016-3-07 11:49:24)

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    原帖由 vcve 于 2016-3-7 11:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

    文献中报道600nm、610nm还有一个是540nm,我认为就是测那个OD600。我只是做金葡和大肠杆菌,我将520-650nm波段都扫了没有吸收。我想用紫外吸收数值来支持我的药物的确抑菌并且找出最低抑菌浓度(MIC),需要做生长曲线吗? ...
    原来我也做的金黄个大肠,600nm吸收峰,做了12h的生长曲线,这样看起来直观一些
  • vcve (2016-3-07 11:50:09)

    QUOTE:

    原帖由 555444 于 2016-3-7 11:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

    原来我也做的金黄个大肠,600nm吸收峰,做了12h的生长曲线,这样看起来直观一些
    我再试试吧,可能是放法问题,那菌液浓度过高会不会影响吸收,还有就是,我的药液为乳状不能直接测紫外,得离心,是不是细菌就下沉了。
  • 555444 (2016-3-07 11:50:26)

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    原帖由 vcve 于 2016-3-7 11:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

    我再试试吧,可能是放法问题,那菌液浓度过高会不会影响吸收,还有就是,我的药液为乳状不能直接测紫外,得离心,是不是细菌就下沉了。
    离心菌体应该是有沉下去了,这做吸光度有影响
  • vcve (2016-3-07 11:50:51)

    QUOTE:

    原帖由 555444 于 2016-3-7 11:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

    离心菌体应该是有沉下去了,这做吸光度有影响
    可是不将脂溶性药物做成乳,是不能与培养基互溶的:如果做成了乳还影响测吸光度。好为难
  • vcve (2016-3-07 11:51:29)

    离心菌体应该是有沉下去了,这做吸光度有影响...

    ===================================================

    对了,OD600值是用紫外分光光度计来测还是用酶标仪测?
  • 555444 (2016-3-07 11:51:44)

    QUOTE:

    原帖由 vcve 于 2016-3-7 11:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    离心菌体应该是有沉下去了,这做吸光度有影响...

    ===================================================

    对了,OD600值是用紫外分光光度计来测还是用酶标仪测?
    紫外测的啊
  • vcve (2016-3-07 11:51:59)

    哦,我今天又测了一次,从200到700nm都有吸收,吸收值一直平稳降低,我是不是只测610nm处的吸收度就行?
  • feima+ (2016-3-07 11:52:26)

    可是不将脂溶性药物做成乳,是不能与培养基互溶的:如果做成了乳还影响测吸光度。好为难...

    ===================================================================================================

    楼主,你的问题解决了么,你的这个乳状是怎么处理的?
    最近我也在做MIC,药品只溶于有机溶剂,不能与培养基互溶,现在都不知道该怎么办了,恳请楼主指点一二,不甚感激!!!
  • vcve (2016-3-07 11:52:47)

    QUOTE:

    原帖由 feima+ 于 2016-3-7 11:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    可是不将脂溶性药物做成乳,是不能与培养基互溶的:如果做成了乳还影响测吸光度。好为难...

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    楼主,你的问题解决 ...
    脂溶性的药物是不能用试管稀释法进行目测比浊或紫外测吸收度,建议你用E纸条法测定MIC值能够准确些。祝你好运!!
  • #问号# (2016-3-07 11:53:05)

    试试用ELX800酶标仪,我们实验室的师姐做MIC就是用酶标仪的!
  • #问号# (2016-3-07 11:53:26)

    原来我也做的金黄个大肠,600nm吸收峰,做了12h的生长曲线,这样看起来直观一些·...

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    您好,我想问一下,你的金黄色球菌的浓度大概是多少cfu/ml测紫外的?还有测出来的ABS值的范围是在0.2以上么?
  • woshituzhu (2016-3-07 11:53:42)

    你好,请问你的问题解决了么?能分享一下么?我也在做这个,但是不知道哪里出问题了
  • vcve (2016-3-07 11:54:01)

    QUOTE:

    原帖由 woshituzhu 于 2016-3-7 11:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
    你好,请问你的问题解决了么?能分享一下么?我也在做这个,但是不知道哪里出问题了
    哪里的问题?
  • 831226 (2016-3-07 11:54:27)


    楼主有没有考虑尽量把药物通过助溶剂,或者让它成盐,直接溶解在水中?