武汉优博生物技术有限公司开发的河豚毒素ELISA检测试剂盒，检测限量达到2 ppb,在美国、日本、俄罗斯、北欧等食品企业、政府检验机构广为应用，质量合格率达到100%，误差1%左右，大量的实验数据标明，河豚毒素检测试剂盒技术水平国际一流水平。

与LC-MS仪器对比试验，结果符合率100%，批间差异小于0.1%，试剂盒稳定高，抗干扰力强。

ELISA标准工作曲线

按照竞争性ELISA操作过程，对不同稀释度的河豚毒素标准液进行测定，以各孔平均OD值与对照组的OD值比值的logit函数为纵坐标，以不同浓度河豚毒素标准品浓度的对数为横坐标，绘制出标准曲线。结果如图所示：线性回归方程为y＝-1.9695x＋3.3899，R²＝0.9902；线性范围为5-500 ng/mL，最低检测限为5 ng/mL。

图1  ELISA标准工作曲线（纵坐标不是抵制率logit(B/B0)）   

2. 回收率实验

添加250 ng和500 ng的河豚毒素标准品的1 g河豚鱼鱼肉中，通过竞争性ELISA检测结果如表所示：添加250 ng标准品时，回收率为159%，添加500 ng标准品时，回收率为108%。产品回收率偏高，我们分析可能是由于洗板次数太多，导致少量的抗体抗原脱离，或者是由于实验时间偏长，抗体的效价减弱引起。产品回收率偏高，不影响检测灵敏度，由于产品检测限较低(5 ng/mL),所以该产品可以满足日常对河豚鱼的检测工作要求。

表2模拟样品回收率实验

3. 稳定性实验

对浓度为10、50、100、150 ng/mL的标准品进行检测，结果如表所示：10-150 ng/mL 4个标准品浓度变异系数为1.93-3.77%，平均变异系数为2.76%。   

变异系数CV %=（标准偏差SD /平均值Mean）×100%

4. 样品中河豚毒素的检测

方法依据：GBT 5009.206-2007 鲜河豚鱼中河豚毒素的测定 

计算公式：X＝C×D×V/m

         X:样品中河豚毒素含量，单位为微克每千克(μg/kg)

         C:酶标板上测的河豚毒素含量，单位为纳克每毫升（ng/mL）

         D:样品稀释倍数

         V:提取溶液的定容体积，单位为毫升（mL）

         m:检测样品的质量，单位为克（g）  

关于河豚鱼的毒性,一般分为4个毒力等级:毒性高于1000 MU/g为剧毒级;介于100 MU/g～1000 MU/g之间为强毒级;介于10 MU/g～100 MU/g之间为弱毒级;低于10 MU/g为无毒级(无毒级中使小鼠致死的情况可视为微毒级)。据张理对鼠单位的定义 (1 MU=0.22 μg)。

根据上述方法绘制标准曲线，并得出回归方程(y=a×x-b)。其中 a、b为系数，y为抑制率(A0-A /A0%)，x为Log(100*河豚毒素浓度)。根据样品的OD₄₉₀ (A)值计算抑制率,再根据公式计算出河豚毒素的浓度。结果上表所示：河豚毒素在浙江与海南省常见河豚鱼的种类分布差异显著，菊黄东方鲀未检测出毒性，属于无毒级别；双斑东方鲀虽有检测出毒性但也属于无毒级别，其中雄性双斑东方鲀的脾脏和胃毒力高于雌性；野生月腹刺鲀的毒力明显高于养殖品种。