【求助】 cDNA-AFLP变性丙烯酰胺凝胶电泳，条带少不清楚

最新回复

• 泉水叮咚 (2015-4-02 19:37:25)

  最右边的是Marker,拖带， 条带少，不整齐，清楚，
  
  问师兄，说可能是胶做得不好，显影时弄得不好，用得试剂甲醛是很久以前的了，
  
  还有可能是电泳仪器的问题，有些旧了，之前有几个同学做得也不大好！
  
  预电泳是50W，30min
  
  正式电泳是40W，2h,电压是2000多V

  
  片段5.jpg

• viviwang1987 (2015-4-02 19:39:53)

  感觉是PCR结果不是很理想吧

• XYZQ (2015-4-02 19:40:13)

  
  有没有预扩增的图片？

• nikonun (2015-4-02 19:41:12)

  把预扩增的图片发来看一下啊。

• viviwang1987 (2015-4-02 19:41:54)

  
  注意醋酸钠的质量，要买质量好的。

• 泉水叮咚 (2015-4-02 19:42:17)

  预扩图，感觉不是很弥散，有条带，但片段不大，最左边的是Marker

  
  2011-10-25预扩2.jpg.jpg

• 泉水叮咚 (2015-4-02 19:43:15)

  QUOTE:

  原帖由 viviwang1987 于 2015-4-2 19:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  注意醋酸钠的质量，要买质量好的。

  用的是无水碳酸钠，价格好像是挺便宜的，国产的

• bring (2015-4-02 19:43:39)

  
  应该是PCR产物的问题啊！

• 泉水叮咚 (2015-4-02 19:46:53)

  QUOTE:

  原帖由 bring 于 2015-4-2 19:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  应该是PCR产物的问题啊！

  酶切没切好吗？

• bring (2015-4-02 19:48:08)

  是预扩增或是选择性扩增的结果不好，你可以先不要跑变性胶，比较简单的鉴别方法是，选择性扩增结束后先琼脂糖检查条带怎么样！我以前就是这么判断的，要是条带比较多，在做page，不行的话就不做了！你可以试着对比一下！

• 泉水叮咚 (2015-4-02 19:49:06)

  QUOTE:

  原帖由 bring 于 2015-4-2 19:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  是预扩增或是选择性扩增的结果不好，你可以先不要跑变性胶，比较简单的鉴别方法是，选择性扩增结束后先琼脂糖检查条带怎么样！我以前就是这么判断的，要是条带比较多，在做page，不行的话就不做了！你可以试着对比一下！ ...

  检测过了，有些拖带，有些条带还是偏小的，但上大板后，小条带出来很少，可能跟仪器电压什么的有关吧！
  
  不知道，不明白。

  
  2011-10-25选扩2.jpg.jpg

  
  复件 2011-10-25选扩2.jpg.jpg

• vcve (2015-4-02 19:50:02)

  酶切没切好吗？
  
  
  =============
  
  应该是的！

• baidukk (2015-4-02 19:51:10)

  
  琼脂糖检查结果不好，就不要指望有好的page了

• mamamiya (2015-4-02 19:51:41)

  你的酶切图片呢？你要知道你的双酶切图片的弥散带应该集中在哪个区域（查文献看看，比较DNA和cDNA有点区别）
  另外，还有一种可能是PCR反应体系有问题，特别是缓冲液（我们那时候用的是buffer和mg2+分开的包装，如果用buffer和mg混合的试剂结果非常差）

• vivian4123 (2015-4-02 19:54:37)

  
  试剂的问题，主要是显色试剂和终止试剂，最好现用现配！再有，建议摸索一下PCR体系，重新跑，没问题的！
  

• 泉水叮咚 (2015-4-02 19:55:18)

  QUOTE:

  原帖由 mamamiya 于 2015-4-2 19:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  你的酶切图片呢？你要知道你的双酶切图片的弥散带应该集中在哪个区域（查文献看看，比较DNA和cDNA有点区别）
  另外，还有一种可能是PCR反应体系有问题，特别是缓冲液（我们那时候用的是buffer和mg2+分开的包装，如果用buffer和mg混合 ...

  之前，酶切直接连接，预扩，选扩，没检查
  今天，重新酶切，琼脂糖检测，但什么也没有，可能是我cDNA浓度太低，太少的原因吧！
                       谢谢！继续努力中！

• dreaming (2015-4-02 19:55:59)

  
  实验这个东西，不能怕费事，有时候你省了一个步骤缺要费好大力气找原因！检测是必要的，呵呵，加油哦..