快速灵敏的增强化学发光免疫分析方法检测肿瘤标志物...
快速灵敏的增强化学发光免疫分析方法检测肿瘤标志物前列腺特异性
前列腺特异性抗原（PSA）是一种由前列腺上皮细胞分泌的，分子量约为 30-33 KDa
的单链糖蛋白分子，是近年来广泛应用于临床筛查前列腺癌（PCa）的特异性肿瘤标志物，同时分析血清 PSA 和游离 PSA（FPSA）水平，并以
FPSA 百分比为指标可以显著区分“诊断灰区”里的良性前列腺疾病（BPH）和PCa。
我们建立了一种增强化学发光酶免疫分析的方法， 并应用于血清中前列腺癌肿瘤标记物PSA 和FPSA
的定量分析。我们用鲁米诺（Luminol）作为化学发光体系的底物，对碘苯酚作为发光增强剂。我们采用双抗体夹心的免疫体系来实现对待测抗原的精确定量分析，首先将一株单克隆抗体利用物理吸附包被在聚苯乙烯材质的
96 孔微孔板上，将样品或者标准品和另一株标记有辣根过氧化物酶（HRP）的酶标记抗体溶液依次加入微孔板各孔，在室温条件下，静置温育 45
min，达到免疫反应平衡，形成固相抗体-抗原-酶标记抗体的免疫复合物，然后利用洗涤的方式将没有结合的酶标记抗体去除，实现免疫复合物上的 HRP
和游离
HRP标记抗体的分离，最后向免疫反应体系中加入化学发光底物，通过测定酶促化学发光的相对发光强度（RLU），结合标准曲线，实现对待测抗原的定量分析。
该方法用于 PSA 和 FPSA 的定量分析，灵敏度分别为 0.01 ng/ml 和 0.02 ng/ml，标准曲线线性范围分别为 5-100
ng/ml 和 0.5-10 ng/ml，相关系数都大于 0.99，分析内、分析间变异分别为 2.7-7.3 %和 3.1-8.8
%，方法学回收率也都在 90–110 %之间，和人血清中常见的 6 种肿瘤标志物 AFP、CEA、CA50、CA125、CA15-3、CA242
几乎没有交叉反应，37℃加速实验 3 天、7 天、10 天，4℃ 1 个月、3 个月、6 个月、9 个月、12
个月稳定性考查结果表明该方法有很好的稳定性。
该方法特异性好，灵敏度、测量范围和稳定性均优于传统的放射免疫分析方法（RIA）和酶免疫分析方法（EIA），操作简便，免疫分析全过程都在室温条件下进行，只需要 45 分钟，大大提高了临床适用性。
