透射电镜样品超薄切片常规制作规程
1．取材：根据实验目的取材，要求部位准确，体积小于2mm3
2．醛类固定：用2%-3%的戊二醛固定2小时
3．清洗：用磷酸缓冲液清洗3次，每次10min
4．锇酸固定：用1%-2%的锇酸固定2~3小时
5．清洗：用磷酸缓冲液清洗3次，每次10min
6．脱水：用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脱水各15min，再用100%乙醇脱水3次，每次30min
7．置换：用环氧丙烷或丙酮置换3次，每次30min
8.浸渍：10hr以上，浸渍过程如下：
①丙酮：包埋剂=3：1的浸渍液浸渍（动物样品1hr，植物样品2~3hr）
②丙酮：包埋剂=1：1的浸渍液浸渍（动物样品1hr，植物样品2~3hr）
③丙酮：包埋剂=1：3的浸渍液浸渍（动物样品4hr，植物样品12~24hr）
④纯包埋剂浸渍（动物样品4hr，植物样品12~24hr）
9．包埋：将样品放入盛有纯包埋剂的包埋板中；包埋剂配方中Epon812，MNA，DDSA，DMP-30的比例见附表
10. 聚合：将包埋板置于40C、60℃条件下各聚合48hr
11．修块：将包埋头修成梯形，且样品表面积小于0.2mm×0.2mm
12．超薄切片：切片厚度50-90nm
13．染色： 铀染色 5~15min清洗
铅染色 5~10min清洗
推荐
