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【求助】琼脂糖新手上路，灌胶漏，跑胶慢，胶还漂起来了
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琼脂糖新手上路，网上自学，望高手关照
1.我用的是北京六一厂产的，有个胶板，还有个托盘，我把胶板放塑料托盘里，谁知道灌胶漏，在胶板底部和托盘面上成一薄胶，不知道有啥影响没？
2.还有，我把胶及胶板放到槽子里，可是胶会在胶板上滑动，最后居然胶漂起来了，我想一个原因是缓冲液加多了但是胶会滑动为什么？
3.我觉得胶跑得特别慢，跑了两个小时，前沿还特别弥散，最后我居然在胶里找不到我的样品，头大，……
请教各位，切盼
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最新回复
dog002 (2014-5-24 15:39:35)
youreyes (2014-5-24 15:40:06)
我把胶及胶板放到槽子里，可是胶会在胶板上滑动，最后居然胶漂起来了，我想一个原因是缓冲液加多了但是胶会滑动为什么？
没有遇到过这样的问题啊，可以把胶拿出来直接放电泳槽里，也可以在胶板里跑，缓冲液刚没过胶一点就行了，不要加的太多，不过也不至于浮起来，你不会用的50x的原液吧。
flower-201 (2014-5-24 15:40:26)
胶块本来就是可以在胶板上滑动的，它不是粘在胶板上的。这没问题。
漂起来的情况就不明白是怎么回事了。没遇到过。
XYZQ (2014-5-24 15:40:42)
idoww (2014-5-24 15:41:22)
我觉得这个问题可能是由于相对于你的样品来说胶浓度过高造成的，你配的胶是百分之多少的？样品的分子量又有多大？
建议你查查TaKaRa产品目录后面的附录，那上面有琼脂糖凝胶的浓度和欲分离样品大小的范围，很有参考价值~
wood533 (2014-5-24 15:41:53)
样本的分子量是多少呢？要根据样本分子量的大小选择胶的浓度的。TaKaRa产品目录上就有。另外，跑电泳的时候电压是多少？是不是太低呀？
kuaizige (2014-5-24 15:42:26)
建议好好看看生化的实验书，严格按照操作步骤来~~~~偶第一次跑胶的时候最多也就手抖了一下加样稍微溢出一点而已~~~
kuaizige (2014-5-24 15:42:44)
可怜的人哪~~这些看别人做过一次就全会了么~~老师实验课的时候也全部教过的啊~~~
lxh031 (2014-5-24 15:43:51)
1.如果漏胶就要重新灌一次胶.造成漏胶的情况,有可能是两块玻璃片之间的塑料带太细了,应该换粗点的,也有可能梳子太粗了,造成边缘上有空隙!!
2.你的第二个问题,可能是你上面做胶影响了,也可能是你加的缓冲液太多了!如果是缓冲液的问题,那你加的缓冲液应该要刚好漫过加样孔!
3.电泳的时候,样品不是垂直的移动,可能你的样品到胶的边上去了
831226 (2014-5-24 15:44:26)
1.我用的是北京六一厂产的，有个胶板，还有个托盘，我把胶板放塑料托盘里，谁知道灌胶漏，在胶板底部和托盘面上成一薄胶，不知道有啥影响没？
2.还有，我把胶及胶板放到槽子里，可是胶会在胶板上滑动，最后居然胶漂起来了，我想一个原因是缓冲液加多了但是胶会滑动为什么？
3.我觉得胶跑得特别慢，跑了两个小时，前沿还特别弥散，最后我居然在胶里找不到我的样品，头大，……
请教各位，切盼
呵呵，楼主好像发完帖子就再也没有回来过啊
第一个问题，漏胶是因为胶板四周并不是完全密闭的，尤其国产的做工又比较差，使用的时间长了四周就会有缝隙，而且胶板如果和底面贴合的不是很紧密的话胶自然就会漏出去。对电泳没有影响，可以把它擦掉。
第二个问题，胶是会在胶板上移动的，你跑了两个小时，你摸摸电泳液是不是有点温热了，呵呵，胶受热以后就会在胶板上滑动，最后飘起来也就不奇怪了，和电泳液多少没有关系。是你电泳的时间太长了，此外你在制胶的时候让胶冷却的时间长一点，最好到实验室先制胶，然后在干别的，放置一个小时以上再跑胶，效果会更好。
第三个问题，不知你的电泳仪是怎么设置的，你的胶浓度是多少，你的目的片段是多少，你跑了两个小时，是不是都跑出去了啊！呵呵！跑个十几分钟看一下，没跑开的话就再跑跑，两个小时有点夸张了，真的！
希望对你有帮助，不过最好能知道你最后怎么解决的问题！
莲花白 (2014-5-24 15:45:00)
楼主遇到的是小问题。
1 漏胶不影响电泳，只要没漏到样品孔太浅，不够上样就没问题。
我做时的一个小习惯，把胶板下的胶去掉再入进电泳槽。
2 胶漂起来与缓冲液多加有关系，但不影响跑胶，一般它漂不出胶板附近，只要漂的不过火就OK。
3 第三个问题有点麻烦，不太知道你的确切状况，提几点仅供参考
a 胶跑的慢，是不是电压不够，我一般用120v，可试试，足够了
b 检查一下缓冲液，是用过一次的还是反复用的，虽然缓冲液可反复使用，但跑了几次，缓冲液中离子分布会有变化 ，影响电泳效率。
c 你的胶浓度？太小带会散，可适当调整下胶浓度
d 是没样品还是没条带？跑胶后，估计你是看不到样品的，恐怕是没有目的条带吧，如果是PCR产物，最可能就是你的引物行不行了，再就是表达量太少，没撤了。只能查一下别人怎么做的了
fox_79 (2014-5-24 15:46:26)
可以用水经常练习,熟能生巧,我就是这样的.祝你好运.
你的胶配的有问题,或者buffer 不好,或者两者,要不按着正常的密度不可能漂起来
票动我觉得是胶的时间不够长.
简森si (2014-5-24 15:47:45)
01)放置过夜没，最好放过夜再点样电泳,这样效果比较好,
02)我觉得胶跑得特别慢，跑了两个小时，前沿还特别弥散，最后我居然在胶里找不到我的样品，头大，……
你的电流如何啊?是不是正常?一般初学者很容易出现电流不正常的现象。比如电压50v以上，可电流却在5mA以下。主要是由于电泳槽没有正确装配，电流未形成通路。包括：a.内外槽装反；b.外槽液过少；c.电泳槽底部的绝缘体未去掉（比如倒胶用的橡胶皮）。
处理办法：电泳槽正确装配即可。
standup (2014-5-24 15:48:09)
多谢大家帮忙！我原先的电压是70V，可能有点低，调到100V后电泳速度快多了，而且我减少电泳缓冲液，上次就已经出来结果了。
小女子在此谢过了！
TAT (2014-5-24 15:48:31)
倒胶一定要等到不烫手时，约60，70度吧，由其是浓度较低的胶，一定要凉到时候，否则由于胶槽有一定的厚度，受热时内外表面膨胀度不一样，挡板的两边一定会出现缝隙，所以会漏．
跑的慢主要是由于电压低，一般应选择５－８Ｖ／ＣＭ，也就是用电压除以你两个电极之间的距离，在者，电泳仪有电压和电流两个主要参数，二者是互相制约的，也就是你把电压定很高，但是电流定很低，那么电压一样上不去，你自己试试就知道了．
orangecake (2014-5-24 15:50:21)
3.我觉得胶跑得特别慢，跑了两个小时，前沿还特别弥散，最后我居然在胶里找不到我的样品，头大，……
我有次倒的胶太薄了，以至于样品跑了出来，不知你是否是这样
orangecake (2014-5-24 15:50:41)
我也有问题，为啥点样的时候，胶老跑！
kuaizige (2014-5-24 15:51:46)
1.我用的是北京六一厂产的，有个胶板，还有个托盘，我把胶板放塑料托盘里，谁知道灌胶漏，在胶板底部和托盘面上成一薄胶，不知道有啥影响没？
2.还有，我把胶及胶板放到槽子里，可是胶会在胶板上滑动，最后居然胶漂起来了，我想一个原因是缓冲液加多了但是胶会滑动为什么？
3.我觉得胶跑得特别慢，跑了两个小时，前沿还特别弥散，最后我居然在胶里找不到我的样品，头大，……
你的这些情况比较集中,通常没有人一次碰到这么多问题吧!
建议做之前好好看看实验指导,
RE1:我也用过北京六一的电泳槽,只要把胶板和托盘好好吻合放好,待胶冷到不烫手就可以倒了,一旦胶倒进去了就不要再碰它,等待半个小时再拔梳子跑胶;胶版和托盘间出现一层薄胶还正常,不影响胶的质量;
RE2:胶并不是粘在胶版上的,当缓冲液有流动时可能会发生活动,最好你把胶版的位置卡在槽中,用一个小枪头把胶与之放平就不要再随便动它,当然缓冲液加多了也不好,没过胶面就可以了;
RE3:你应该根据样品分子量的大小选择胶的浓度,电压太小了也不好,就会很慢了.但是也不应该找不到样品啊,除非你跑过头了,时间太长,要么就是你忘记加EB或者Goldview等DNA结合剂了.
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