【求助】细胞生长慢，急死人了

最新回复

• pou (2014-11-04 15:50:57)

  
  新复苏的细胞需要传一两代后才能生长旺盛， 表急。
  

• junhun (2014-11-04 16:10:27)

  新复苏的细胞最好在72小时里不要跟换培养基，或传代。

• junhun (2014-11-04 16:11:08)

  QUOTE:

  原帖由 junhun 于 2014-11-4 16:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  新复苏的细胞最好在72小时里不要跟换培养基，或传代。

  不会巴，新复苏的细胞怎么会在72小时内不换培养基呢？要知道复苏细胞时要去除冻存时加入的DMSO艾。

• dragonkilly (2014-11-04 16:11:44)

  你那细胞是否感染了支原体？

• bgf5 (2014-11-04 16:11:59)

  别急，慢慢来！
  
  请问是什么细胞？新复苏的有多久了？具体有何表现（比如形态、镜下有没有其它的异物等）？ 新复苏一般要等3-5天左右才能传代的，还有的要加其它的促长因子什么的。

• zzzz (2014-11-04 16:12:17)

  看来不同的lab 做细胞的习惯差异挺大的。

• wood533 (2014-11-04 16:12:37)

  
  这与你冻存时的细胞量有关系，细胞量少了，生长自然就慢了。另外，在冻存和复苏的时候，细胞会有损伤，因此，刚刚复苏，长得慢是比较正常的。细胞复苏讲究一点：先将解冻后的细胞悬液加入培养瓶，然后慢慢加入含血清的新鲜培养基，让细胞逐渐适应渗透压的变化（当然，如果你的冻存液血清浓度与生长培养基血清浓度相等就不必考虑此操作步骤）。待细胞生长3～4小时贴壁后，及时更换培养基，除去DMSO，以防止它对细胞生长产生负的影响。

• 3648755 (2014-11-04 16:13:01)

  这与你冻存时的细胞量有关系，细胞量少了，生长自然就慢了。另外，在冻存和复苏的时候，细胞会有损伤，因此，刚刚复苏，长得慢是比较正常的。细胞复苏讲究一点：先将解冻后的细胞悬液加入培养瓶，然后慢慢加入含血清的新鲜培养基，让细胞逐渐适应渗透压的变化（当然，如果你的冻存液血清浓度与生长培养基血清浓度相等就不必考虑此操作步骤）。待细胞生长3～4小时贴壁后，及时更换培养基，除去DMSO，以防止它对细胞生长产生负的影响。
  
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  同意，dmso对细胞的影响还是很大的 接种的密度不能低否则可能长不满

• nut6694 (2014-11-04 16:13:23)

  
  试试以下方法： 1.换一下血清； 2.加一些丙酮酸钠； 3.继续传几代也可能会自动恢复生长速度。 若如还不行，考虑以下因素： 1.细胞老化； 2.支原体污染。

• uaubc (2014-11-04 16:13:40)

  
  我们实验室是细胞解冻后， 离心，再接种， 然后24小时后换液，以除去死细胞，或细胞碎片等

• huifeng0516 (2014-11-04 16:13:59)

  
  培养液有无放的太久？放置太久细胞所需谷氨酰氨基本水解，因此要添加一定浓度的谷氨酰氨溶液
  

• 天蝎座 (2014-11-04 16:14:44)

  四个生长时期
  
  细胞每转接一代，培养的群体细胞都要经过四个生长时期：潜伏期，对数生长期，稳定期，衰亡期。 新接种的细胞在培养液中经过一段悬浮状态，贴附于培养器皿的表面，贴壁后，细胞并不马上分裂，仍要有一个潜伏期。各种细胞贴附速度不同，这与细胞种类、培养基成分、底物性质等条件有关。（初代细胞培养贴壁较慢，大约10～24小时之多，连续细胞系和恶性细胞系较快，30分钟内即可完成。）潜伏期的长短与细胞接种量、细胞种类、培养基性质等有关。（初代细胞培养潜伏期长，大约24～96小时，传代细胞和肿瘤细胞潜伏期短，约6～24小时。）

• summerxx (2014-11-04 16:15:03)

  解冻后在离心，可不可能对细胞造成更大的损伤，而使得活细胞变得更少？从而影响它对新环境的适应能力，使潜伏期延长！

• idea2011 (2014-11-04 16:15:22)

  估计是细胞量太少了。我有一次用冻存后剩余在培养瓶的细胞加了培养液继续养，就因为只剩下几个细胞，所以两个星期后细胞才张满

• bgf5 (2014-11-04 16:15:38)

  
  细胞的生长有密度效应，如果冻存的细胞太少，复苏后要生长的十分缓慢，建议冻存要细胞时每管要合适的数量。如果 细胞太少的话可以加一些饲养细胞。

• wood533 (2014-11-04 16:15:53)

  
  我复苏的细胞第二天碎片太多，细胞贴壁，我该怎么处理呀 ？

• 3N4G (2014-11-04 16:16:12)

  
  细胞复苏时可用Hanks液洗两遍再接瓶

• qhyu (2014-11-04 16:16:30)

  
  细胞复苏时保证足量的细胞是复苏成功的关键

• dragonkilly (2014-11-04 16:16:45)

  
  培养液的PH值有问题会很慢。换一瓶的试一试。

• 轰轰 (2014-11-04 16:18:05)

  
  我们lab一般将冻存管取出解冻后直接离心，去掉上清，加新鲜培养基吹匀后直接加入细胞瓶中，过10个小时左右后换液，加pBS洗去死细胞以免阻碍活细胞的生长