【求助】HPLC测试结果不一致，求解决方法

最新回复

• baidukk (2015-1-21 16:10:38)

  实验搞定， 试了很多方法，最后还是通过更换一下buffer，刚刚解决，还不知道是否稳定，先上来和大家分享一下，谢谢各位的帮助

• TNT (2015-1-21 16:11:01)

  你没说清楚，我觉得初步看是里面的两个成分。

• baidukk (2015-1-21 16:12:08)

  QUOTE:

  原帖由 TNT 于 2015-1-21 16:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  你没说清楚，我觉得初步看是里面的两个成分。

  不是两个成分，如果是未酶解的，是不会在这个位置出现峰的，只有加了相应的酶才会有峰出现

• pengke1983 (2015-1-21 16:12:41)

  图一样品可能过载，也可能液相方法学耐用性低。

• baidukk (2015-1-21 16:13:21)

  QUOTE:

  原帖由 pengke1983 于 2015-1-21 16:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  图一样品可能过载，也可能液相方法学耐用性低。

  图1与图2是从一管样品中吸取进样的，唯一不同的地方就是第一针在实验开始的时候，第二针在实验快结束的时候

• pengke1983 (2015-1-21 16:15:00)

  第一针是否充分平衡？梯度还是等度？

• dior (2015-1-21 16:15:43)

  是不是样品溶液不稳定啊

• 6327555 (2015-1-21 16:16:41)

  样品降解了，所以前面出现其他杂质峰

• bohe221 (2015-1-21 16:46:31)

  要么你跑到后面柱子比较脏了，这种问题我也遇到过，尤其如果是中药。也可能是你样品本身就不稳定。建议把柱子冲洗干净后再做一次，样品的测定不要间隔时间太远

• eric930 (2015-1-21 16:47:20)

  使用流动相溶解样品，或者高水相溶剂溶解样品

• rxcc33 (2015-1-21 16:47:45)

  使用流动相溶解样品，加上保护柱。进样阀注意要时常清洗。
  重复进样看看。

• dragonkilly (2015-1-21 16:48:16)

  哈哈 这个问题我遇到过 说说我的经验吧 有好几个办法：调节进样量，换流动相（估计你用的是国产的） 调节流动相比例 必要时重新做标准溶液 ，还有一个是 你的标准曲线用流动相稀释看看效果等等很多办法吧 流动相的ph 流动相的分离能力等等都需要考虑在内！
  

• yhz1973 (2015-1-21 16:48:37)

  首先要用流动相配药，
  还有你的药物浓度是不是有点高了啊

• milkdog (2015-1-21 16:48:55)

  
  楼主你走BLANK没有出现怪峰，说明仪器系统没有问题。
  从楼主的描述来看，最大的变量是时间。不知楼主你的样品稳定性如何，在试验过程中是否要求控温。

• baidukk (2015-1-21 16:49:23)

  第一针是否充分平衡？梯度还是等度？
  
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  平衡好了，因为是新柱子，我是过夜平衡的。是等度洗脱的

• baidukk (2015-1-21 16:49:43)

  样品降解了，所以前面出现其他杂质峰
  
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  新配制的样品，不经过复杂的处理过程，直接加buffer稀释就可以了，应该不会是样品降解的，这个是标准液

• baidukk (2015-1-21 16:50:03)

  是不是样品溶液不稳定啊
  
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  稳定的，是基本的buffer，样品平常都是保存常温的，只有配制好了之后才保存-20℃，我每次取一支，用完就丢掉了，不重复使用的
  

• baidukk (2015-1-21 17:11:42)

  要么你跑到后面柱子比较脏了，这种问题我也遇到过，尤其如果是中药。也可能是你样品本身就不稳定。建议把柱子冲洗干净后再做一次，样品的测定不要间隔时间太远
  
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  这个是新柱子，而且后面出现的峰型才是我想要的，和我拿到的文献上的峰型一致，我想的是拿后面的结果

• baidukk (2015-1-21 17:12:13)

  使用流动相溶解样品，或者高水相溶剂溶解样品
  
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  用流动相吗？我这个有个protocol的，是用的酶解样品的酶的buffer，这个buffer我单独跑过几次，没有影响的，而且我的流动相就是高水相的，就是水

• baidukk (2015-1-21 17:46:53)

  使用流动相溶解样品，加上保护柱。进样阀注意要时常清洗。
  重复进样看看。
  
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  流动相我的是低PH的，我怕会引起样品变性，不过也值得尝试一下，谢谢