【求助】PCR产物直接测序和克隆后测序的区别

最新回复

• baidukk (2016-4-04 22:52:51)

  
  不好意思，楼上几位，最大的区别不是你们说的，前面的一些碱基，也可以测序获得，如果反向不够长的话，可以设计通用引物测序，可以得到完整的序列。
  最主要的区别是：直接测序是测你总的PCR产物，是总的情况的反应，不能看出一些量少的东西。但是克隆测序，一个克隆只是你PCR产物中的一条连。就是你克隆进去并逃到的一种情况。不能反应你PCR的总情况。

• kulee (2016-4-04 22:53:07)

  
  其实最主要的区别就是看你是否需要完整、可信的序列了
  PCR产物直接测序时 前30～50bp和终止前的序列都是无法正确读取的
  如果克隆到载体上 用通用引物测序 就可以测一段载体的序列避免这个问题 从而获得完整的序列信息
  仅供参考

• vcve (2016-4-04 22:53:29)

  
  载体克隆回新增一部分突变。

• cbou876 (2016-4-04 22:53:47)

  
  不好意思，楼上几位，最大的区别不是你们说的，前面的一些碱基，也可以测序获得，如果反向不够长的话，可以设计通用引物测序，可以得到完整的序列。
  最主要的区别是：直接测序是测你总的PCR产物，是总的情况的反应，不能看出一些量少的东西。但是克隆测序，一个克隆只是你PCR产物中的一条连。就是你克隆进去并逃到的一种情况。不能反应你PCR的总情况。

• H2O (2016-4-04 22:54:05)

  
  那么我要用PCR测序验证一种病毒，是否需要克隆呢？

• baidukk (2016-4-04 22:54:28)

  看你的病毒大小
  如果不大的话不需要
  sars就是直接用75对引物扩增的

• yhtfyl (2023-2-24 08:32:21)

  感谢楼主分享，受教了