关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×

荧光原位杂交技术的定义、原理、背景及优势

2017.2.15

  荧光原位杂交方法是一种物理图谱绘制方法,使用荧光素标记探针,以检测探针和分裂中期的染色体或分裂间期的染色质的杂交。荧光原位杂交技术是一种重要的非放射性原位杂交技术。

  它的基本原理是:如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的,二者经变性-退火-复性,即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛,可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应,经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。

  荧光原位杂交技术问世于70年代后期,其曾多用于染色体异常的研究,近年来随着FISH所应用的探针钟类的不断增多,特别是全Cosmid探针及染色体原位抑制杂交技术的出现,使FISH技术不仅在细胞遗传学方面,而且还广泛应用于肿瘤学研究,如基因诊断基因定位等 。

  原有的放射性同位素原位杂交技术存在着较多缺点,诸如每次检验均需重新标记探针,已标记的探针表现出明显的不稳定性,需要较长的曝光时间和对环境的污染等。

  此外,由于放射性银粒和染色体聚集的不同平面,可能引起计数上的误差等。与之比FISH则具有:

  ①操作操作简便,探针标记后稳定,一次标记后可使用二年;

  ②方法敏感,能迅速得到结果;

  ③在同一标本上,可同时检测几种不同探针;

  ④不仅可用于分裂期细胞染色体数量或结构变化的研究,而且还可用于间期细胞的染色体数量及基因改变的研究等特点。

推荐
关闭