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【求助】pcr，求分析

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-9-25 11:30    作者: luoliqiong    来源: 分析测试百科网

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【求助】pcr，求分析
前图是用一个人的模板DNA做的梯度pcr， 后图是在梯度之后分别用10个人模板的pcr，maker是2000bp，目的条带是256bp，求分析
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  • IAM007 (2014-9-25 11:30:50)


    那十个人的DNA检测了么？

  • TNT (2014-9-25 11:31:50)

    模板浓度很低啊

  • luoliqiong (2014-9-25 11:32:22)

    QUOTE:

    原帖由 IAM007 于 2014-9-25 11:30 发表

    那十个人的DNA检测了么？
    模板浓度测了，10ng/微克以下。我加大浓度以后还是p不出来，和图2没有异常。

  • wiwi (2014-9-25 11:32:44)

    完全就是没有P出来，全是引物二聚体。

  • wanglaoshi (2014-9-25 11:33:00)


    如果真的是引物二聚体的话，你可以该考虑下退火温度选择是否正确。

  • 小荷尖尖 (2014-9-25 11:33:24)

    这么小的片段怎么用这么大的marker啊，跑到最后是二聚体还是目的片段都看不清了，建议换个浓度1.5% 的胶+ 1000bp的marker重跑下，再看。如果是二聚体可以考虑跑个梯度PCR摸索一下退火温度，或者增加一点循环数

  • whitesheep (2014-9-25 11:33:41)

    退温或引物有问题

  • 66小飞侠 (2014-9-25 11:33:59)

    2000marker最下面那条是100bp，第一个图的条带应该是250多一点，但是似乎也有100以下的（估计引物二聚体）
    第二个图就是除了引物二聚体啥都没有
    模板浓度太低了，基本上我觉得可以重提了
    先摸引物退火温度
    如果是目的条带不亮，据说可以把第一次PCR之后的产物作为模板再扩一次（这样做不一定有结果，而且如果是除了引物二聚体没别的的话，扩多少次也是浪费。。）

  • cocacola (2014-9-25 11:34:14)

    做梯度的时候不是已经扩出来了吗，只是产物少，而在有图根本就没有目的提哦啊带，如果是按照左图的条件p的结果，可能是模板有问题。

  • mamamiya (2014-9-25 11:34:51)

    你是不是循环次数少了啊，，pcr的怎么可能条带这么浅。。
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