【求助】蛋白质电泳

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各位大虾,我最近在做SDS-PAGE这一块,前面的几次试验较为顺利,可是最近做的PAGE电泳,所有的电泳条带都跑的很靠前(10%),胶的浓度没有什么变化,溶液冲洗配置后仍然这样。前期的时候电泳用的时间比较长,而现在一般2H即可完成,使用的是MINI系列电泳仪
望各位指点迷津
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最新回复

  • kuohao17 (2014-6-18 16:47:50)


    可能是你以前的样品分子量大,现在的样品分子量稍小,你把凝胶浓度调到12%试一下,还有可能是tris-HCL 的PH低了,会延长电泳时间。
    电极缓冲液要新鲜配制,使用不超过三次
  • DONT (2014-6-18 16:48:10)


    电泳时间短和温度有直接关系。我的也是这样,把电泳缓冲液使用前放在4度里,跑电泳时别忘了冷凝。
  • eric930 (2014-6-18 16:48:31)


    我的不只是时间短,而且几乎所有的带全都跑到前面2CM左右的范围内,拉不开(带白质的分子量与前几次的是一样的)
  • nn255 (2014-6-18 16:48:56)


    你的样品是什么样的啊??
    煮后离一下试试
    你的槽子没有短路现象吧?
    tris-HCL pH是否正确?
    冷凝系统良好?
    祝实验顺利!!!
  • xue258 (2014-6-18 16:49:16)


    电泳这方面应该不会出什么问题,应该是样品制备的问题,如果tris-HCL pH不对的话,marker也应该跑不开。
  • eric930 (2014-6-18 16:49:41)


    谢谢各位,我估计可能是温度太高
    正在进行实验,结果出来后告诉大家
  • yes4 (2014-6-18 16:50:02)


    被忽视的问题:
    电源-----有时候不能总是相信它屏幕上显示的数字!
  • eric930 (2014-6-18 16:50:23)


    问题依然没有解决,电泳时间和她没有关系,依然是 前沿的蛋白质带十分集中
  • orangecake (2014-6-18 16:50:47)


    加大凝胶浓度到12%试了没有?
    再有就是你的目的蛋白分子量是否低于10KDa?如果是那么建议你跑tricine-sds-page。
  • duoduo (2014-6-18 16:51:04)


    蛋白质电泳SDS-PAGE上呈现竖状的条纹,而且很难脱色,这是什么呢?
  • shenkunjie (2014-6-18 16:51:25)


    是tris-HCL 的浓度和pH出现了问题,以前这种情况我也碰到过。
  • kuaizige (2014-6-18 16:51:43)


    SDS-PAGE上有竖条纹是因为样品中有未溶解的沉淀,建议上样前短暂离心,取上清上样电泳
  • fox_79 (2014-6-18 16:52:04)

    可能是胶的问题,也许配出来的胶的浓度与实际的浓度不一样,是不是ACR出了什么问题,配出来的胶的浓度其实很小,因此所以全跑到前面了,建议重配一下ACR
  • applebook=213 (2014-6-18 16:52:21)


    考虑一下样品的处理
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