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【求助】蛋白质电泳
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发表于: 2014-6-18 16:47 作者: eric930 来源: 分析测试百科网
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【求助】蛋白质电泳
各位大虾,我最近在做SDS-PAGE这一块,前面的几次试验较为顺利,可是最近做的PAGE电泳,所有的电泳条带都跑的很靠前(10%),胶的浓度没有什么变化,溶液冲洗配置后仍然这样。前期的时候电泳用的时间比较长,而现在一般2H即可完成,使用的是MINI系列电泳仪
望各位指点迷津
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【求助】蛋白质电泳
我也来说两句
查看全部回复
最新回复
kuohao17
(2014-6-18 16:47:50)
可能是你以前的样品分子量大,现在的样品分子量稍小,你把凝胶浓度调到12%试一下,还有可能是tris-HCL 的PH低了,会延长电泳时间。
电极缓冲液要新鲜配制,使用不超过三次
DONT
(2014-6-18 16:48:10)
电泳时间短和温度有直接关系。我的也是这样,把电泳缓冲液使用前放在4度里,跑电泳时别忘了冷凝。
eric930
(2014-6-18 16:48:31)
我的不只是时间短,而且几乎所有的带全都跑到前面2CM左右的范围内,拉不开(带白质的分子量与前几次的是一样的)
nn255
(2014-6-18 16:48:56)
你的样品是什么样的啊??
煮后离一下试试
你的槽子没有短路现象吧?
tris-HCL pH是否正确?
冷凝系统良好?
祝实验顺利!!!
xue258
(2014-6-18 16:49:16)
电泳这方面应该不会出什么问题,应该是样品制备的问题,如果tris-HCL pH不对的话,marker也应该跑不开。
eric930
(2014-6-18 16:49:41)
谢谢各位,我估计可能是温度太高
正在进行实验,结果出来后告诉大家
yes4
(2014-6-18 16:50:02)
被忽视的问题:
电源-----有时候不能总是相信它屏幕上显示的数字!
eric930
(2014-6-18 16:50:23)
问题依然没有解决,电泳时间和她没有关系,依然是 前沿的蛋白质带十分集中
orangecake
(2014-6-18 16:50:47)
加大凝胶浓度到12%试了没有?
再有就是你的目的蛋白分子量是否低于10KDa?如果是那么建议你跑tricine-sds-page。
duoduo
(2014-6-18 16:51:04)
蛋白质电泳SDS-PAGE上呈现竖状的条纹,而且很难脱色,这是什么呢?
shenkunjie
(2014-6-18 16:51:25)
是tris-HCL 的浓度和pH出现了问题,以前这种情况我也碰到过。
kuaizige
(2014-6-18 16:51:43)
SDS-PAGE上有竖条纹是因为样品中有未溶解的沉淀,建议上样前短暂离心,取上清上样电泳
fox_79
(2014-6-18 16:52:04)
可能是胶的问题,也许配出来的胶的浓度与实际的浓度不一样,是不是ACR出了什么问题,配出来的胶的浓度其实很小,因此所以全跑到前面了,建议重配一下ACR
applebook=213
(2014-6-18 16:52:21)
考虑一下样品的处理
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【求助】蛋白质电泳
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kuohao17 (2014-6-18 16:47:50)
可能是你以前的样品分子量大,现在的样品分子量稍小,你把凝胶浓度调到12%试一下,还有可能是tris-HCL 的PH低了,会延长电泳时间。
电极缓冲液要新鲜配制,使用不超过三次
DONT (2014-6-18 16:48:10)
电泳时间短和温度有直接关系。我的也是这样,把电泳缓冲液使用前放在4度里,跑电泳时别忘了冷凝。
eric930 (2014-6-18 16:48:31)
我的不只是时间短,而且几乎所有的带全都跑到前面2CM左右的范围内,拉不开(带白质的分子量与前几次的是一样的)
nn255 (2014-6-18 16:48:56)
你的样品是什么样的啊??
煮后离一下试试
你的槽子没有短路现象吧?
tris-HCL pH是否正确?
冷凝系统良好?
祝实验顺利!!!
xue258 (2014-6-18 16:49:16)
电泳这方面应该不会出什么问题,应该是样品制备的问题,如果tris-HCL pH不对的话,marker也应该跑不开。
eric930 (2014-6-18 16:49:41)
谢谢各位,我估计可能是温度太高
正在进行实验,结果出来后告诉大家
yes4 (2014-6-18 16:50:02)
被忽视的问题:
电源-----有时候不能总是相信它屏幕上显示的数字!
eric930 (2014-6-18 16:50:23)
问题依然没有解决,电泳时间和她没有关系,依然是 前沿的蛋白质带十分集中
orangecake (2014-6-18 16:50:47)
加大凝胶浓度到12%试了没有?
再有就是你的目的蛋白分子量是否低于10KDa?如果是那么建议你跑tricine-sds-page。
duoduo (2014-6-18 16:51:04)
蛋白质电泳SDS-PAGE上呈现竖状的条纹,而且很难脱色,这是什么呢?
shenkunjie (2014-6-18 16:51:25)
是tris-HCL 的浓度和pH出现了问题,以前这种情况我也碰到过。
kuaizige (2014-6-18 16:51:43)
SDS-PAGE上有竖条纹是因为样品中有未溶解的沉淀,建议上样前短暂离心,取上清上样电泳
fox_79 (2014-6-18 16:52:04)
applebook=213 (2014-6-18 16:52:21)
考虑一下样品的处理
【求助】蛋白质电泳