【求助】单抗电荷异质体

最新回复

• ending (2015-9-05 16:59:30)

  
  对定量生物学活性的影响？

• luoliqiong (2015-9-05 17:00:04)

  
  只是想搞清修饰的对电荷异质体的具体影响。不知道哪位大牛能慷慨解答下，有劳了！

• IAM007 (2015-9-05 17:00:25)

  
  1、不一定形成碱性峰，因为氧化和异构化影响的是构象，并不是酸碱性基团直接的增加。而构象的改变带来的与色谱柱之间的结合情况是不定的。 我自己做的研究也发现，氧化也形成酸性峰。异构化我没怎么研究清楚。可以多看看这方面的文献
  2、光照稳定性，我看到过详细做这块的研究，，酸性峰增加也是很正常，其一是脱酰胺，二是焦谷氨酸环化，三组氨酸等氧化均会形成酸性峰。详见附件文献
  若有疑问可以在一起探讨探讨。

• IAM007 (2015-9-05 17:05:57)

  大家好，我有个关于单抗电荷异质体的问题想问下，
  1、氧化和ASP异构化应该会形成碱性峰，为什么张博的PPT里把这2项列为视情况而定了？
  2、另外我最近做个关于光照对单抗稳定性影响的实验，光照10天后用CEX（阳离子交换色谱）检测发现酸性峰增高而不是碱性峰增加，请问这个现象如何解释？
  非常感谢！
  ......
  
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  继续讲这个问题：1、天冬酰胺异构化对电荷的影响，目前所看到的均是在碱性峰中，但其因果还不得而知。它影响构象，随机性比较大，不好说决定形成碱性，可能还未发现。2、蛋氨酸氧化，同样影响的是构象。大多数文献说得是在碱性峰，但其实有时它会在酸性峰中产生，而我的结果也是酸性峰， 你可以用双氧水试试。

• am10 (2015-9-05 17:09:55)

  
  大家有没有使用质谱解析抗体修饰的书籍或文献可以推荐？我一直挺疑惑质谱到底怎么实现的。
  有人曾经给我建议，将整个抗体进行酶切，直接进质谱进行肽段分析，整体分析哪些肽段发生修饰，这种思路可行吗？质谱解析是不是非常复杂？

• 月牙牙 (2015-9-05 17:10:29)

  大家有没有使用质谱解析抗体修饰的书籍或文献可以推荐？我一直挺疑惑质谱到底怎么实现的。
  有人曾经给我建议，将整个抗体进行酶切，直接进质谱进行肽段分析，整体分析哪些肽段发生修饰，这种思路可行吗？质谱解析是不是非常复杂？
  
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  没别的办法，要想搞清楚那个位点发生修饰或者异质，必须采用质谱进行肽段分析。整体分析可能只能推测发生哪类变化，但是对抗体大蛋白很难。
  要是多肽或者小蛋白，或许可能。例如加16倍数的可能是氧化修饰，分子量不变的可能Asp异构，分子量多1可能脱氨等等。

• ero11 (2015-9-05 17:10:46)

  质谱的理论知识参考书籍 网上有很多，翻译后修饰的文献也一推一推网上搜搜都是。上传一篇共参考。
  一般都是CRO公司直接给你测的，不用自己分析结果，自己也不会分析那些离子源。

• chengjie79 (2015-9-05 17:11:12)

  QUOTE:

  原帖由 ero11 于 2015-9-5 17:10 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  质谱的理论知识参考书籍 网上有很多，翻译后修饰的文献也一推一推网上搜搜都是。上传一篇共参考。
  一般都是CRO公司直接给你测的，不用自己分析结果，自己也不会分析那些离子源。 ...

  光照造成的一些氨基酸的变化，有时很复杂也很有意思。比如Trp吸收能量会造成一些不仅仅是自身的变化，进行传递还会导致一些其他氨基酸的变化，或者光照直接对二硫键照成的影响，都是有文献可查并且case by case的。
  个人觉得有条件最好自己弄台质谱，CRO不总是那么靠谱。

• vvmmoy (2015-9-05 17:11:38)

  
  glycan variations为什么是碱性峰？我理解glycan variations是由马来酸之类的造成的adduct formation,应该是酸性峰。难道是两个概念？

• eor (2015-9-05 17:11:56)

  你说的glycan variations 指的的N糖链接的寡糖（glycosylation，糖基化），还是通过NH2或者赖氨酸链接的寡糖（glycation 加糖作用）？ 前者视情况而定，后者一般是酸性异构体。。
  我看到的 一般的Glycan variations 多指前者的。- -

• ending (2015-9-05 17:12:25)

  glycan variations为什么是碱性峰？我理解glycan variations是由马来酸之类的造成的adduct formation,应该是酸性峰。难道是两个概念？
  
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  同意楼上的，确实glycation会使得IEC变的偏acidic。
  "Glycated lysine residues no longer carry a positive charge, and a net acidic change was observable"
  来自“A study in glycation of a therapeutic recombinant humanized monoclonal antibody: Where it is, how it got there, and how it affects charge-based behavior”.

• mickeylin (2015-9-05 17:12:43)

  
  最近也发现样品放时间长了酸性峰比率加大了，WCX检测从刚才开始的4%酸性峰到现在升高到13%左右的比率了。

• 49888 (2015-9-05 17:13:44)

  你说的glycan variations 指的的N糖链接的寡糖（glycosylation，糖基化），还是通过NH2或者赖氨酸链接的寡糖（glycation 加糖作用）？ 前者视情况而定，后者一般是酸性异构体。。
  我看到的 一般的Glycan variations 多指前者的。- -
  谢谢~
  因为平时看习惯了glycosylation,一下子看到glycan还以为是glycation
  ......

• am10 (2015-9-05 17:14:04)

  
  其它类蛋白产品是否也必需考虑电荷异质体的问题？

• xevin (2015-9-05 17:15:50)

  QUOTE:

  原帖由 am10 于 2015-9-5 17:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  其它类蛋白产品是否也必需考虑电荷异质体的问题？

  生物制品强调多原理多手段分析，蛋白类/抗体/多肽都一样。

• 人小鬼大 (2015-9-05 17:16:19)

  最近也发现样品放时间长了酸性峰比率加大了，WCX检测从刚才开始的4%酸性峰到现在升高到13%左右的比率了。
  
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  这个稳定性做多久了啊，增加挺快的啊~
  对于酸碱性峰增加的原因，大家在看到结果是第一反应觉得应该是什么呢？比如酸性峰增加大多数都是脱氨引起；如果是碱性峰增加，那很可能是普氨酸氨化和/或甘氨酸脱羧？当然最后的确证还是要靠MS~