简述肝功能试验的操作方法

　　1.血清蛋白测定

　　不同种类蛋白质常采用不同方法测定。白蛋白、球蛋白等常用化学法和电泳法进行测定，纤维蛋白原常用热沉淀比浊法测定，甲胎蛋白常采用酶联免疫吸附法或放射免疫分析法等进行测定。

　　2.血清酶测定

　　常检测血清中的转氨酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶、单胺氧化酶等，一般应用赖氏比色法和速率法检测。目前临床常用速率法，多采用半自动分析仪进行测定，取血清、相应底物缓冲液，立即吸入自动分析仪，在37℃环境中孵育，在特定波长下比色，进行吸光度测定，计算相应酶的活性。

　　3.血清胆红素测定

　　通常采用重氮试剂法或胆红素氧化酶法进行血清胆红素测定，按测定物质的种类在试管中加入血清和相应的试剂，混合后在特定波长下比色，读取各管吸光度，比对确定相应胆红素浓度。

　　4.血清胆汁酸测定

　　常用测定方法有高效液相色谱法、放射免疫分析法、酶免疫分析法、胆酸酶比色法，其中胆酸酶比色法简便、快速，可手工操作，也能进行自动化分析，是临床实验室常用的血清胆汁酸测定方法，具体操作为：在试管中加入血清和含有酶的特制试剂，混合后在特定波长下比色，读取各管吸光度，计算胆汁酸浓度。

　　5.血氨测定

　　方法有微量扩散法、离子交换法、谷氨酸脱氢酶法和氨离子选择电极法，其中微量扩散法已淘汰，目前应用最多的是谷氨酸脱氢酶法，在试管中加入血清、a-酮戊二酸和还原型辅酶Ⅱ，最后加入谷氨酸脱氢酶，血氨的下降速率与血氨浓度成正比，在特定波长处测定吸光度，与同样处理的标准管比较，计算血氨含量。

　　6.凝血因子测定

　　（1）凝血酶原时间（PT）：待测血浆加入过量的含钙组织凝血活酶，重新钙化的血浆在组织因子存在时通过外原性激活途径激活因子X成Xa, Xa使凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转化为纤维蛋白而凝固，测定凝固所需时间即为凝血酶原时间。

　　（2）活化部分凝血活酶时间（APTT）：待测血浆加入凝血活酶，在钙离子的参与下纤维蛋白转化为不溶性的纤维蛋白而凝固，测定凝固所需要的时间即为活化部分凝血活酶时间。

　　（3）凝血酶时间测定（TT）：待测血浆加入适量凝血酶，纤维蛋白原转化为不溶性的纤维蛋白而凝固，测定所需时间即为凝血酶时间。

　　（4）纤维蛋白原浓度测定：高浓度的凝血酶存在时，待测稀释血浆的凝固时间与其纤维蛋白原含量成反比关系。测量该稀释血浆凝固时间，换算即得纤维蛋白原浓度。

　　7.血清前白蛋白测定

　　常用测定方法有醋酸纤维素薄膜电泳法、免疫扩散法及散射比浊法。