【求助】]第一次做MTT·····已经白忙活了一个月了

最新回复

• ha111 (2015-1-14 22:48:11)

  可能是你的消化时间过了，导致你24后还是圆的。一般种版24h就可以加药的。HepG-2长得很快的，你种了7万，很快长爆了，可能24h不用，你都看不到底了。你可以先查下怎么培养细胞，多看些视频，对你很有帮助。

• quiqui008 (2015-1-14 22:48:55)

  QUOTE:

  原帖由 xuuuu 于 2015-1-14 22:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  我第一次做MTT····这次铺了两块板：
  肝癌Hep G2 细胞：70000个/ml 每个孔100微升
  肺癌细胞A549：5000个/ml 每个孔100微升
  培养24h后····显微镜下看到细胞连板的40%面积都不到····有些细胞甚至还是圆的···和 ...

  HepG2细胞消化时间太长了。按正常的胰酶活力，1-2分钟就够了。建议消化细胞时，在显微镜下边观察边消化，这样比较容易掌握消化进度。祝好！

• baidukk (2015-1-14 22:49:19)

  A549，500一个孔是不是太少了啊

• jingling845 (2015-1-14 22:49:54)

  消化液中细胞成团若只是一部分，轻轻振荡可成个分散，个人觉得消化时间足够

• xuuuu (2015-1-14 22:50:17)

  QUOTE:

  原帖由 jingling845 于 2015-1-14 22:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  消化液中细胞成团若只是一部分，轻轻振荡可成个分散，个人觉得消化时间足够

  我拿的是0.25%的胰酶消化5min·····肉眼可见一些白色的雾一样的东西···
  显微镜下看到有部分是圆的细胞，还有一大团的细胞·····请问这样可以做MTT？

• redbutterfly (2015-1-14 22:51:20)

  我记得消化2min就够了啊，5min太长了吧，时间短一点试试
  

• viviwang1987 (2015-1-14 22:52:00)

  估计是消化过头了。如果你进实验室不久，细胞培养细胞消化的实验还是在同实验室师兄师姐的指导下做比较好，有些东西网上说也说不清楚。接种密度，我们以前都是师兄师姐做预实验摸好的条件然后我们直接用了。你可以问问你们实验室的师兄师姐他们一般用多大密度。一般密度太大确实有很多细胞贴不上，但你只有40%的融合度，也不至于呀。

• baidukk (2015-1-14 22:52:16)

  铺板之后轻微震荡使之贴壁，96孔板特别不好贴细胞，换液容易冲洗掉
  

• baidukk (2015-1-14 22:52:37)

  可能是你的消化时间过了，导致你24后还是圆的。一般种版24h就可以加药的。HepG-2长得很快的，你种了7万，很快长爆了，可能24h不用，你都看不到底了。你可以先查下怎么培养细胞，多看些视频，对你很有帮助。
  
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  我的的都是4000每孔，刚刚好。不能让细胞长太多，48h后，会长的特别满，结果就不能用了

• ladyhuahua (2015-1-14 22:52:54)

  你这俩细胞密度差太多了吧？一个每孔7000，一个每孔500？A549我们一般一孔里5000到8000，也是100微升，HepG2我自己没养过，但是师妹做也和A549差不多的密度.

• tewank (2015-1-14 22:53:13)

  A549，500一个孔是不是太少了啊

• changlhsyo (2015-1-14 22:53:30)

  消化时间太长了，做实验要灵活，消化的时间不是一定点，可以在消化的时候在显微镜下观察大部分细胞开始变圆就可以了。一般1-3min足矣！
  

• 49888 (2015-1-14 22:54:25)

  a549太低了，每孔500？A549我一般一孔里5000以上，才能较好地反应线性关系。

• any333 (2015-1-14 22:55:04)

  看成MIT了。。。

• dmg (2015-1-14 22:55:20)

  其实不少了
  96孔板不好帖，ln/fn 先铺24h小时
  或者换24孔板做，
  消化成团其实是因为没终止
  做mts就好了。某mega的产品 消化啥，直接加就是了。。。。。。。傻瓜无脑一步法。。。。

• xuuuu (2015-1-14 22:55:58)

  你这俩细胞密度差太多了吧？一个每孔7000，一个每孔500？A549我们一般一孔里5000到8000，也是100微升，HepG2我自己没养过，但是师妹做也和A549差不多的密度.
  
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  不好意思···当时打错了··我铺的是5000个/孔，请问一下贵实验室的A549用的是什么培养基，一般多久传一次？我们这边的A549和HepG2比起来长得非常慢，传完代3天还没长满·····

• changlhsyo (2015-1-14 22:56:24)

  QUOTE:

  原帖由 xuuuu 于 2015-1-14 22:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  你这俩细胞密度差太多了吧？一个每孔7000，一个每孔500？A549我们一般一孔里5000到8000，也是100微升，HepG2我自己没养过，但是师妹做也和A549差不多的密度.
  
  ...

  A549用的F-12，试过其它培养基都不行。细胞长得慢的话，建议传的时候先别扩太多，达到一定密度生长速度才会快。