【求助】QPCR加样及数据处理问题

字体: 小中大 | 打印发表于: 2015-8-03 17:07 作者: ROSE李来源: 分析测试百科网

刚接触QPCR相对定量分析方法，有几个问题超级迷茫，希望各位大侠给予帮助，谢谢！
1、内参跟目的必须要在同一个体系内吗？可不可以分开做？因为分组太多，一起做的话，PCR仪上的孔不够呀！那我应该怎么做呢？
2、我做的是肿瘤小鼠用不同药物处理取组织检测有无基因表达差异，这样的话，我数据处理的时候，应该以哪个组作为校准样本呢，因为校准样本的2∧ΔΔCT数值得出就是1，没有办法进行数据统计，这不就等于少算了一个组吗？（写的很麻烦，希望有人看得懂！）就像下图中组1的情况！

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【求助】QPCR加样及数据处理问题

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49888 (2015-8-03 17:08:03)

上图！！！！！

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ROSE李 (2015-8-03 17:10:21)

这样的话，别的组统计时候都是一个范围，但是第一个组只是1这个数值，这样不就是少了一组的统计数据了吗？
49888 (2015-8-03 17:11:37)

别的组得出来的结果不是范围啊，就是一个数值；
你运用2-ΔΔCT法本来就是相对定量法，所得结果是实验组相比对照组目的分子的相对表达倍数，对照组的数据本身并没有消失啊，只是相当于变为“1”了。。。
xingyi08 (2015-8-03 17:12:04)

别的组得出来的结果不是范围啊，就是一个数值；
你运用2-ΔΔCT法本来就是相对定量法，所得结果是实验组相比对照组目的分子的相对表达倍数，对照组的数据本身并没有消失啊，只是相当于变为“1”了。。。

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不是数据处理的之前，是三次重复试验，每次三个平行样的嘛，所以到时候出来的肯定不是一个数值，而是一个区间啊，是吧
49888 (2015-8-03 17:13:07)

三次重复得到均值而后用2-ΔΔCT法，只有一个相对倍数啊。。。
ROSE李 (2015-8-03 17:13:41)

QUOTE:
原帖由 49888 于 2015-8-3 17:13 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
三次重复得到均值而后用2-ΔΔCT法，只有一个相对倍数啊。。。
哦，好吧！可是看人家文献上都有一个区间范围的，不知道怎么得来的
ROSE李 (2015-8-03 17:14:20)

你是说对照组的量如果看成是1，它的标准误的bar是怎么算出来的是吗？
一种方法是：因为同一实验要重复3次，你把3次实验对照组的2-DeltaCt的均值看作1，每次实验的2-DeltaCt值和这个均值算标准误，不就有浮动区间了吗？
然后，3次试验组的DeltaCt都要减去对照组的DeltaCt均值，再算2-DeltaDeltaCt。
不知我说明白了没有，说的对不对？
newway (2015-8-03 17:14:35)

相对定量肯定得找个标准的，那个1就是标准，其实那个区间应该是三次的平均值加减标准误
ns5fan (2015-8-03 17:16:26)

对照组好像就应该是1，没有标准误，大老板是这么说的。重复试验没次都是以对照组为参照，它每次都是1