【求助】近日想检验一个分子量为25KDa的蛋白

字体: 小中大 | 打印发表于: 2016-3-13 11:24 作者: 8899 来源: 分析测试百科网

本人分子生物盲一名，近日想检验一个分子量为25KDa的蛋白，但是不知道该如何下手。听那个老师说分子量过大，要进行酶切，这一步如何做呢？我看文献用的胰蛋白酶啊。如果质谱做出来，是否有什么分析软件课推荐呢？是应该用生物质谱还是用液质联用呢？

wwwh (2016-3-13 11:25:10)

你可以用LC-MS/MS用trypsin酶切
这个分子量也可以不用酶切, 直接做MALDI,
ESI理论上也能也能看到峰, 只是会带多电荷, 所以看到的大概会比较乱
QQ爱 (2016-3-13 11:25:41)

PAGE电泳，染色，然后交给公司处理了。生工做质谱一个样品600元。
xgy412 (2016-3-13 11:26:10)

传统的小分子质谱实验利用ESI做，原因是小分子质合比（m/z）是1.ESI也可以做蛋白是因为蛋白的（m/z）大于1，所以也可以显峰
daomei (2016-3-13 11:26:37)

还想问一下，我的蛋白刚开始是用PBS溶的，2.5mg/kg，做质谱不能用磷酸盐，经过透析袋（没用过）透析去除磷酸盐，那么就应该剩下水了是吧？质谱不是要挥发性溶剂么？那怎么办啊？
冰激凌 (2016-3-13 11:27:04)

直接做ESI的不知道, 做过几次, 不是自己处理的样品
做MALDI的话,我用ziptip处理除盐,然后就直接点matrix了
做LC-MS/MS, 最后反正要把trypsin降解后的多肽片断萃取到acetonitrile和formic acid的水溶液中,然后最后真空抽干
大大 (2016-3-13 11:27:24)

是不是还要把trypsin去掉啊？你那个降解后的片段如何萃取呢？
wawa11 (2016-3-13 11:27:47)

我想问一下，多肽片段怎么萃取到乙腈和甲酸的水溶液中？乙腈和甲酸都是溶于水的啊？
青青草 (2016-3-13 11:28:08)

跑胶，酶解，酶解后萃取