[求助]低氧细胞培养

最新回复

• yhz1973 (2012-9-01 14:00:51)

  以下方法：
  1.低氧模型为一有进出气孔的小室, 置于37 ℃恒温箱内, 持续通入94 % N2∶5 % CO2∶1 %O2 的混合气体, 维持饱和湿度, 常氧对照置于37 ℃、5 % CO2 空气和饱和湿度的培养箱中。
  2.低氧培养箱
  3.氯化钴处理 细胞模拟缺氧

• ritou1985 (2012-9-01 14:01:09)

  
  如果你们实验室长期进行乏氧实验的话可以购买一套乏氧培养箱，如果没有这个条件的话，也可以考虑使用临时试管内通氮气的方法：
  具体方法如下：
  有几个两通的广口瓶，消毒好，一个放入硫酸铜溶液，主要作用是消毒，一个放入NaOH，主要是除湿，实验时候通氮气30分钟，检测处理效应，计算氧增比，如果符合文献要求的话，可以考虑使用这种乏氧条件！具体可以参考郑秀龙教授编写的甘氨双唑钠研究论文集

• 白白的 (2012-9-01 14:01:32)

  
  氯化钴 这种试剂在国内那里可以买到，价格贵不？

• IAM007 (2012-9-01 14:01:59)

  咱们可真称得上是同行了，我做细胞缺氧都一年了，很高兴与你分享我的经验。
  1、其实最精密、准确的缺氧装置就是买一套乏氧培养箱，不过一般实验室可达不到这个条件，我查过一套乏氧培养箱的价格是普通二氧化碳培养箱的10倍，将近40万。
  2、另外就是简易的实验装置，我查过好多中外文献，自己研究了一套装置，只需一个真空干燥器、一个测氧仪和一罐缺氧气体（95 % N2∶5 % CO2），祛除真空干燥器的玻璃塞，装上一个橡皮塞，塞上打两个孔，一个是进气孔，一个是出气孔，进气孔通缺氧气体，出气孔水封，以一定流量通气一端时间后（视干燥器大小而定），用测氧仪在出气口端测氧浓度，控制氧浓度小于1%。
  3、通过细胞活性实验（MTT）及一些酶学实验我已证实细胞确实受到缺氧损伤，后来又检索到第三军医大学发表的关于缺氧装置的一篇文献更加证实这个装置的实用性，现将这篇文章上传，与大家分享，希望这套缺氧装置能够得到普及

• bongte (2012-9-01 14:02:18)

  
  我也在做缺氧培养,我们这里有缺氧培养箱,氧浓度在1%-33%变动,但是我试过两次效果不是太好,可能不同细胞的敏感性不同吧.缺氧培养箱也存在问题就是细胞内的氧浓度没法监测,我们是从培养箱显示氧浓度降到1%计时的,但是实际上细胞内的氧浓度什么时候达到1%不清楚,因此也不是很准确.
  除了上述战友说的方法外,可以用抗霉素A诱导化学性低氧,但是这种化学试剂是剧毒,购买比较麻烦!

• 白白的 (2012-9-01 14:02:40)

  
  谢谢各位战友，按照各位的方法，我自己也准备动手作一个简易的试试。

• jujuba (2012-9-01 14:03:04)

  2、另外就是简易的实验装置，我查过好多中外文献，自己研究了一套装置，只需一个真空干燥器、一个测氧仪和一罐缺氧气体（95 % N2∶5 % CO2），祛除真空干燥器的玻璃塞，装上一个橡皮塞，塞上打两个孔，一个是进气孔，一个是出气孔，进气孔通缺氧气体，出气孔水封，以一定流量通气一端时间后（视干燥器大小而定），用测氧仪在出气口端测氧浓度，控制氧浓度小于1%。
  
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  请问：细胞是在什么中培养的？干燥器中的氧浓度达到1%了，但是培养瓶或培养皿中的氧浓度什么时候达到1%怎么知道呢？还有比如说缺氧处理10分钟，这个10分钟从什么时候算起呢？

• yapuyapu (2012-9-01 14:03:43)

  
  3.氯化钴处理 细胞模拟缺氧
  方便实用

• 白白的 (2012-9-01 14:04:03)

  sigma 公司有好几种氯化钴，究竟是用那一种呢？

• bongte (2012-9-01 14:04:40)

  不好意思没交代清楚，细胞的培养液应换成预先缺氧处理的DHANK’S液，以达到缺氧和缺糖的目的，我是将DHANK’S液装在小瓶内置于干燥器内，用真空泵将干燥器内抽成负压（0.08MPa),使DHANK’S液中氧气排出,而后通以缺氧气体(95 % N2∶5 % CO2)，37度温箱内30分钟，使缺氧气体充分进入DHANK’S液中，可见DHANK’S液中酚红指示剂的颜色变为橙黄色，说明DHANK’S液偏酸了。而后快速用缺氧处理的DHANK’S液给细胞换液，置于预先通入缺氧气体的干燥器中（可以减少缺氧平衡时间），达到氧浓度要求后，将干燥器置于37度温箱内，缺氧开始计时。至于DHANK’S液中的氧浓度应用血气分析仪检测。另外按文献报道可在干燥器内加入一定量的无菌水以保证细胞缺氧环境的湿度。

• ending (2012-9-01 14:04:59)

  问个问题，这样是不是无菌操作应该要求很严？

• bongte (2012-9-01 14:05:23)

  是的，无菌操作要很严格，用来做缺氧装置的干燥器也应用紫外灯照射消毒。

• 白白的 (2012-9-01 14:05:44)

  
  我查过很多文献，化学性缺氧和物理缺氧在很多生化指标以及对很多基因表达的改变是不相同的，所以感觉模拟缺氧还是用物理方法比较好。lijianyu118战友你一直用自己简易制作的缺氧装置嘛？

• 白白的 (2012-9-01 14:06:13)

  
  低氧模型为一有进出气孔的小室, 置于37 ℃恒温箱内, 持续通入94 % N2∶5 % CO2∶1 %O2 的混合气体, 维持饱和湿度, 常氧对照置于37 ℃、5 % CO2 空气和饱和湿度的培养箱中。
  这个气体从那里可以买到呢？好像气体公司都是卖单种气体，而不是混和气体的。不知道那位有比较详细的信息，还有价格？
  急盼回复！各位战友斑竹费心了。

• kulee (2012-9-01 14:06:31)

  供气公司可以提供三气瓶，约350元/瓶。化学诱导剂可以用sigma的Cobalt（ii）Chloride 97％，Catalogue Number232696，USD 27.3/5g。请问lijianyu118 战友缺氧多长时间对细胞产生损害？有文献报道短期缺氧可以刺激肿瘤细胞增殖
  ，是否对作用时间有研究?谢谢！