【求助】蛋白纯化过程中电导的变化

最新回复

• quiqui008 (2014-1-22 17:02:06)

  
  说明你的缓冲体系有问题
  电导与你的缓冲体系中盐浓度有关。
  应该是你2次使用的buffer不是一次配制的，配制不准确。

• 9900 (2014-1-22 17:02:22)

  电导反映的是溶液中的离子强度，你说的电导变化指的什么，变化范围多少？
  你用的初始溶液配方是否一致，样品预处理过程有无变化，洗脱条件是否改变。
  电导值在离子交换层析中是重要的参数，电导值越高蛋白与柱子的结合力越弱，越容易被洗脱下来。疏水层析则是电导越高越容易挂柱，因为要加盐上样，在凝胶过滤层析中没有特别重要的意义。

• 079777chao (2014-1-22 17:02:44)

  
  我是用镍柱做重组蛋白的纯化，共纯化了四个表达蛋白（这四种蛋白都是来源于同一个菌的不同蛋白），上样缓冲液和洗脱缓冲液中只是咪唑的浓度不同，后者高，离子强度是一样的；另外，这四个蛋白纯化时所用的缓冲液都是同一次配制的。
  纯化过程中主要通过紫外、电导、温度这三个参数来检测，前三个纯化时电导的变化是：从上样缓冲液开始到洗脱完基本上都是29-30ms /cm范围内波动，到换成水之后就下降到0.02ms/cm左右；第四个蛋白纯化时电导与前三个纯化时的不同之处：电导在洗脱过程中很快下降到4.5ms/cm左右，而后又快速地升到了29ms/cm左右。
  电导这样变化说明什么？望各位多多帮忙！谢谢了！

• 079777chao (2014-1-22 17:04:04)

  
  应该是没有完全平衡好吧，可能管路中还有少量别的溶液

• abc816 (2014-1-22 17:04:26)

  
  第四个蛋白你有重复做一次么？没有误操作？

• dongdongqiang (2014-1-22 17:04:49)

  
  亲和柱一般不太考虑电导。
  溶液体系中不同蛋白对电导的影响也不同，个人觉得亲和柱没必要关注电导的变化，除非你有特殊要求。系统给出的各项参数，未必在所有类型的层析中都要检测。比如电导，在疏水或离子交换中考察更适合。

• am10 (2014-1-22 17:11:14)

  贴图 帮你分析
  离子柱走梯度最可能变化

• PINK (2014-1-22 17:11:40)

  
  我是用镍柱做重组蛋白的纯化，共纯化了四个表达蛋白（这四种蛋白都是来源于同一个菌的不同蛋白），上样缓冲液和洗脱缓冲液中只是咪唑的浓度不同，后者高，离子强度是一样的；另外，这四个蛋白纯化时所用的缓冲液都是同一次配制的。
  纯化过程中主要通过紫外、电导、温度这三个参数来检测，前三个纯化时电导的变化是：从上样缓冲液开始到洗脱完基本上都是29-30ms /cm范围内波动，到换成水之后就下降到0.02ms/cm左右；第四个蛋白纯化时电导与前三个纯化时的不同之处：电导在洗脱过程中很快下降到4.5ms/cm左右，而后又快速地升到了29ms/cm左右。
  电导这样变化说明什么？望各位多多帮忙！谢谢了！
  我也觉得做亲和层析纯化时不用关注电导值，电导值是在离子交换层析中是重要的参数。亲和层析的优点是可以在高盐的浓度下操作。。所以最好在平衡和洗脱缓冲液中加入0.15-0.5m的nacl，消除一些离子交换作用，降低非特异性吸附。

• dongdongqiang (2014-1-22 17:12:54)

  我是用镍柱做重组蛋白的纯化，共纯化了四个表达蛋白（这四种蛋白都是来源于同一个菌的不同蛋白），上样缓冲液和洗脱缓冲液中只是咪唑的浓度不同，后者高，离子强度是一样的；另外，这四个蛋白纯化时所用的缓冲液都是同一次配制的。
  纯化过程中主要通过紫外、电导、温度这三个参数来检测，前三个纯化时电导的变化是：从上样缓冲液开始到洗脱完基本上都是29-30ms /cm范围内波动，到换成水之后就下降到0.02ms/cm左右；第四个蛋白纯化时电导与前三个纯化时的不同之处：电导在洗脱过程中很快下降到4.5ms/cm左右，而后又快速地升到了29ms/cm左右。
  电导这样变化说明什么？望各位多多帮忙！谢谢了！
  你的电导那样变化最可能的原因是你用水洗柱子后没有，冲系统泵，水还存在于你的管道以及系统的泵内，所以在你洗脱时首先是水进入柱子里面，这个时候电导是下降的，等到管道以及泵内的残留的水洗完后，你换上去的BUFFER开始出来了，这个时候电导就开始上升到你BUFFER的电导值。

• 079777chao (2014-1-22 17:13:50)

  我是用镍柱做重组蛋白的纯化，共纯化了四个表达蛋白（这四种蛋白都是来源于同一个菌的不同蛋白），上样缓冲液和洗脱缓冲液中只是咪唑的浓度不同，后者高，离子强度是一样的；另外，这四个蛋白纯化时所用的缓冲液都是同一次配制的。
  纯化过程中主要通过紫外、电导、温度这三个参数来检测，前三个纯化时电导的变化是：从上样缓冲液开始到洗脱完基本上都是29-30ms /cm范围内波动，到换成水之后就下降到0.02ms/cm左右；第四个蛋白纯化时电导与前三个纯化时的不同之处：电导在洗脱过程中很快下降到4.5ms/cm左右，而后又快速地升到了29ms/cm左右。
  电导这样变化说明什么？望各位多多帮忙！谢谢了！
  明显误操作，有的蛋白是有吸收离子的现象。但肯定没那么明显。建议重做一遍，把具体操作步骤贴上来。