【求助】改变什么条件消除引物二聚体

最新回复

• mickeylin (2015-4-01 16:59:55)

  奇怪，没有看到二聚体啊？或者说二聚体并不严重啊

• 扑啦啦 (2015-4-01 17:00:14)

  
  提高退火温度

• sistis (2015-4-01 17:00:49)

  
  似乎可以添加 DMSO 或者glycine betaine
  
  后面一种网上介绍的，我们实验室木有用过。。。
  
  但是DMSO似乎会增加突变。。。

• 月牙牙 (2015-4-01 17:01:04)

  你指的是非特异性扩增吧，提高退火温度呀，不建议加入DMSO，如果是扩增基因后续有用的话，当然只是检测有无，我觉得是可以的。

• 小螺号 (2015-4-01 17:01:26)

  引物少加点 会好点吧 并且这个应该不是二聚体 是非特异性扩增吧 建议换引物
  

• one (2015-4-01 17:01:53)

  
  最本质的方法是设置一对好的引物，做个退火温度，选择较高一点的退火温度，还有就是少加点引物

• october7 (2015-4-01 17:02:41)

  如果这是引物二聚体也太亮了一些吧，是拖尾的问题吧，主要是要优化退火温度，退火温度主要参照软件设计引物里分析出来的温度，而不是合成引物单子上写的引物。优化了还有，就是引物浓度比较高了。
  

• 131415 (2015-4-01 17:03:08)

  引物稀释浓度为10uM时，10ul反应体系一般每条引物只加0.1-0.2ul。

• 小鱼鱼 (2015-4-01 17:03:30)

  
  退火温度

• 9900 (2015-4-01 17:03:45)

  
  建议换热启动TAQ酶，或其他预混液试试

• 笑弯了腰 (2015-4-01 17:04:25)

  哥告诉你，你那不叫二聚体，一般二聚体大小在一百bp以下，有什么问题可以来找我，pcr方面的问题，没有哥解决不了的。包括理论

• XYZQ (2015-4-01 17:04:48)

  降低引物浓度 ，提高退火温度

• 喵咪 (2015-4-01 17:05:02)

  提高退火温度！

• 月牙牙 (2015-4-01 17:05:20)

  如果用fhusion的酶的话里面都有DMSO的，加了能提高特异性，提高退火温度也可以，不知道你这marker 的最小带是多大，引物二聚体一般都在100bp以下的。

• 西子 (2015-4-01 17:05:40)

  仔细看了看。。。发现楼主确实不是引物二聚体。。。很有可能引物特异性不强。。。