【转帖】【分享帖】原代培养海马神经元经验

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• dog002 (2015-7-11 10:56:03)

  哎，怎么人家国外的基本全用Neurobasal系列？应该是神经元细胞专用培养基吧！
  还有，国外一般都用番木瓜酶啊？我记得是，这个番木瓜酶还想是菲特异性的，偏好水解半胱氨酸巯基，不知对否？
  另外，我想请教个问题啊，那个细胞冷冻复苏怎么弄啊，是不影响很大啊，因为我要出去做电生理实验，所以要经过这一步！
  麻烦老大讲解一下！

• dog002 (2015-7-11 10:56:47)

  
  另外，你那缓冲盐和D-hank's用微孔滤膜抽滤行不？怎么要高压蒸汽灭菌嘛！

• dior (2015-7-11 10:57:18)

  
  哎，怎么人家国外的基本全用Neurobasal系列？应该是神经元细胞专用培养基吧！
  对啊，neurobasal 就是专用啊，gibco公司有的啊，以前好像是用DMEM/F12

• NBA (2015-7-11 10:57:59)

  QUOTE:

  原帖由 dior 于 2015-7-11 10:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  哎，怎么人家国外的基本全用Neurobasal系列？应该是神经元细胞专用培养基吧！
  对啊，neurobasal 就是专用啊，gibco公司有的啊，以前好像是用DMEM/F12

  re：Neurobasal是好啊，可是贵啊，DMEM/F12完全可以代替的……
  原代组织分离个人感觉，机械分离的作用好些

• NBA (2015-7-11 10:59:05)

  QUOTE:

  原帖由 dog002 于 2015-7-11 10:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  另外，你那缓冲盐和D-hank's用微孔滤膜抽滤行不？怎么要高压蒸汽灭菌嘛！

  无机盐缓冲液，高压灭菌操作简单、效果彻底……
  微孔滤膜主要用于活性物质（血清、培养基等）的灭菌

• txwuyan (2015-7-11 11:00:20)

  
  小伙子 还挺专业啊， 我们的培养方法基本相同，只是我感觉阿糖胞苷几乎不起作用。

• NBA (2015-7-11 11:00:43)

  专业，哈哈，谈不上……如果对细胞的纯度要求不大的話，我觉得阿糖胞苷可以不加，无血清高糖的培养液本身有利于神经元的生长。

• ending (2015-7-11 11:01:44)

  
  re：Neurobasal是好啊，可是贵啊，DMEM/F12完全可以代替的……
  原代组织分离个人感觉，机械分离的。
  赞同

• u234 (2015-7-11 11:02:27)

  小伙子 还挺专业啊， 我们的培养方法基本相同，只是我感觉阿糖胞苷几乎不起作用。
  
  ===============================================================================================================
  
  个人觉得加了阿糖胞苷还是很有用的，我是接种48小时加阿糖胞苷，加上24小时就能很明显看出细胞有变化，板子里变的很干净。是不是你用的浓度不够呢？

• H2O (2015-7-11 11:03:23)

  
  请问楼主 培养的 海马神经元 后期 有没有做 western 等试验？ 蛋白量够不够？

• NBA (2015-7-11 11:03:41)

  
  可以做，你多种几板细胞，一起收集，蛋白量足够

• youyou99 (2015-7-11 11:03:58)

  
  我的细胞第二天满视野中都是小圆点，换液也洗不掉，是不是死细胞？总起来存活的神经元很少。我做皮层，5只新生鼠0.125胰酶消化10min，难道还消化过了，可是文献消化的时间还要长啊，应该消化完是什么样子，离心后又是什么样子，有什么特点吗，自我感觉吹打还算较轻，到底是怎么回事，非常郁闷！

• whitesheep (2015-7-11 11:06:20)

  
  换液：随后每3 d半量换液。
  my question is : when you half changed the medius every 3 days, whether the medium needs to be made fresh everytime, or you can make some medium at the first time, and then use everytime.
  Thanks!

• 49888 (2015-7-11 11:06:59)

  
  请问你的问题解决了吗，小圆点还有吗，仔细看它会运动吗？我也在做皮层，怀疑是污染

• iii_ii (2015-7-11 11:08:56)

  
  解决了，我觉得那是死细胞，呵呵，祝你成功

• IAM007 (2015-7-11 11:09:35)

  
  俺养的也很干静，漂亮，还有光晕！

• www.1 (2015-7-11 11:09:52)

  
  微血管是如何剔除的呢?

• tudou85 (2015-7-11 11:10:22)

  海马细胞中有的添加N2-supplement而有的人添加B27-supplement，有的人两种都添加，哪位高人能解释一下吗？应该如何添加啊？

• yizhi (2015-7-11 11:10:41)

  不管怎么加阿糖胞苷，培养7天后基本上纯度就不能保障了，胶质细胞疯狂的占据了主导 实验做完了，这方面的不足始终没有进一步完善。所以只好选4天的细胞做实验对象了，尽管细胞还没到稳定阶段。

• dog002 (2015-7-11 11:11:41)

  你好，我现在在做这一块，很想看看你的方法，可否麻烦你往我邮箱发一份呢？非常感谢哈！