查看完整版本请点击这里:
【求助】请问RT-PCR提出总RNA后能否跑琼脂糖电泳检测
各位好【求助】请问RT-PCR提出总RNA后能否跑琼脂糖电泳检测
请教一个问题,我做RT-PCR,在提取到总RNA后,逆转录之前,
我想跑一个琼脂糖电泳,检验一下RNA有没有提出.
今天刚跑完一个,第一次,只看到了泳道,没有带
请各位大侠帮忙解释一下,是何原因?
因为我在制胶和配缓冲液时所用的液体都没有进行灭RNA酶处理,
这会不会影响结果,比如把RNA 分解了?还有琼脂糖的浓度有具体要求吗?
谢谢
另外,在水溶RNA时,因为没有去离子的DEPC水,我自己用双蒸水和DEPC配置的,这会不会对RNA或电泳产生影响?
谢谢
查看完整版本请点击这里:
【求助】请问RT-PCR提出总RNA后能否跑琼脂糖电泳检测
【求助】请问RT-PCR提出总RNA后能否跑琼脂糖电泳检测
最新回复
mamamiya (2016-2-29 15:47:55)
森林木 (2016-2-29 15:48:22)
双蒸水和DEPC足够了,我就用蒸馏水和DEPC。再来试试,可能是 RNA量不够,。
555444 (2016-2-29 15:48:53)
乖乖!看来编书者是在梦中想到变性甲醛的?
987789 (2016-2-29 15:49:17)
我有跑了一次,加了四份样本,每份3ul+3ul溴酚蓝,150V电泳,1XTBE缓冲液,1%胶。结果发现,有涌道,但涌道中没发现带。比较奇怪的是,在四个加样孔内都有一条明显的细条带,问过一个老师,他确定是带,但也没能解释原因。如果是带的话,意味着RNA在孔中没有跑出来?为什么有这种现象?
是不是我的胶浓度不合适?
另外,我刚刚做RT-PCR,不知道你们说的“先看一下18s和28s”是什么意思?该怎样看?
请Fang CY和redsun能继续给予帮助和指点。
感激。
one (2016-2-29 15:49:41)
关于加样孔中的细带,可能是基因组DNA。建议你还是麻烦点用变性甲醛电泳RNA。请到下面的帖子处看一下。
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=403521&sty=1&tpg=3&age=0')
feima+ (2016-2-29 15:50:04)
jude (2016-2-29 16:22:32)
ququer787 (2016-2-29 16:22:55)
04906 (2016-2-29 16:23:14)
可以试试分子克隆3的戊二醛电泳
比甲醛好闻
9900 (2016-2-29 16:23:38)
你第二次跑胶时在样孔中出现的细条带可能不是核酸,是其它的什么杂质。
跑胶检测一下总RNA是否完整提出,18s和28s及5s三条带清晰可见可以佐证你提取得较成功。
987789 (2016-2-29 16:24:58)
zhenxin (2016-2-29 16:25:28)
idea2011 (2016-2-29 16:25:45)
还有你在加样的时候样品与溴酚蓝的比例是不是小了呀,我觉得4:1也可以,试试看
idea2011 (2016-2-29 16:26:07)
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=403521&sty=1&tpg=3&age=0')
sobi (2016-2-29 16:26:35)
【求助】请问RT-PCR提出总RNA后能否跑琼脂糖电泳检测