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【讨论帖】柱温对分离度和保留时间影响
在操作HPLC时,色谱柱是在室温环境下工作的。大多数的工作环境温度是不断变化的,温度的差别就会引起较复杂的问题。温度的影响在所有的色谱分析方式中都是存在的,HPLC方法中的洗脱方式受温度的影响。【讨论帖】柱温对分离度和保留时间影响
等度洗脱时温度会影响保留时间,当温度升高时所有的色谱峰都前移了,等度洗脱时一般温度每升高1℃,保留时间会缩短(1~3)%。温度变化对梯度洗脱和等度洗脱的影响趋势是一样的。温度变化对梯度洗脱的影响要小于对等度洗脱的影响。即便如此,若梯度洗脱时不控制温度的话,保留值一般也会有较大的变化。温度变化还可能引起选择性显著变化。
正如柱子不能完全平衡将导致保留时间的重现性差一样,柱温不平衡也会导致不理想的后果,这个问题在峰宽上的影响尤其明显。当温度变化时除了选择性和保留时间的变化之外,峰宽也会发生变化。升高温度通常会使理论塔板数升高,峰宽变窄,由于峰面积不变,峰越窄就会越高,因此升高温度可以达到更小的检测限。
柱子里的温度变化也会影响峰形。当流动相和柱子之间的温差增大时,由温度不平衡而导致的峰变形就会加剧。
为了获得一致的结果我们必须要控制柱温,使用柱温箱是最好的办法。如果没有柱温箱,最有效的办法就是将色谱柱隔绝在一个温度波动最小的地方。
除上述这些以外,还具有哪些影响。请大家畅所欲言。我只起到抛砖引玉的作用。谢谢大家。
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最新回复
boom (2016-4-30 15:24:57)
不只是保留时间
如果样品的分离度本来就差,温度波动会影响分离度,最终影响含量计算
yjf1026 (2016-4-30 15:25:28)
适当提高柱温可以缩短分析时间
yhn (2016-4-30 15:42:13)
HPLC使者 (2016-4-30 15:42:31)
必须恒温。
XYZQ (2016-4-30 17:05:22)
queen (2016-4-30 17:05:41)
docsy (2016-4-30 17:05:56)
831226 (2016-4-30 17:06:21)
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