【求助】离子交换分析电荷变异体

字体: 小中大 | 打印发表于: 2015-9-07 11:42 作者: is2011 来源: 分析测试百科网

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【求助】离子交换分析电荷变异体

各位好，我现在在做一个单抗，我们单抗的质量标准中，电荷变异体一项有规定Sub-1应小于等于，Sub-2应小于等于，R-1应小于等于。请问有知道Sub-1，Sub-2，R-1代表什么意思的吗？

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october7 (2015-9-07 11:42:30)

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原帖由 is2011 于 2015-9-7 11:42 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

各位好，我现在在做一个单抗，我们单抗的质量标准中，电荷变异体一项有规定Sub-1应小于等于，Sub-2应小于等于，R-1应小于等于。请问有知道Sub-1，Sub-2，R-1代表什么意思的吗？ ...
我猜的
Sub-1，代表第一分支产物
Sub-2，代表第二分支产物
R-1代表第一步反应物
49888 (2015-9-07 11:42:53)

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原帖由 october7 于 2015-9-7 11:42 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

我猜的
Sub-1，代表第一分支产物
Sub-2，代表第二分支产物
R-1代表第一步反应物
既然是离子交换分析电荷变异体，sub-1/2大概是碱性变异体、酸性变异体么？
楼主可多提供些信息。
veiwu (2015-9-07 11:43:10)

分析电荷变异体如果需要高通量的话，离子交换显然不是首选，最好上基于IEF技术的iCE3(Protein Simple公司），好使、靠谱！
www.1 (2015-9-07 11:43:33)

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原帖由 veiwu 于 2015-9-7 11:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

分析电荷变异体如果需要高通量的话，离子交换显然不是首选，最好上基于IEF技术的iCE3(Protein Simple公司），好使、靠谱！
分的东西不一样，一个net charge，一个surface charge，ls有做过实验验证了么？
牢骚科科长 (2015-9-07 11:43:58)

QUOTE:
原帖由 www.1 于 2015-9-7 11:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

分的东西不一样，一个net charge，一个surface charge，ls有做过实验验证了么？
??
没有疑问的是：IEF和IEX-HPLC都可以用来分析单抗的电荷变异体。但是至于是否是“分的东西不一样，一个net charge，一个surface charge ”，却是值得商榷。
我由于也不敢太确定，就在网上查了一下，查询结果貌似显示，两者都是基于蛋白的静电荷进行分离的。参考文章可见：
cuturl('http://userpages.umbc.edu/~dfrey1/documents/vhpionex.pdf')
摘录几句关键点：
Ion-exchange chromatography separatesproteins by charge primarily through electrostatic interactions between chargedamino acid side chains and the surface charge of the ion exchange resin. Proteinretention has been explained as a "netcharge" phenomenon in which a protein is considered to be a point chargeand retention is a function of the netcharge of the protein at the pH of the mobile phase.
上面第一句也提到了”surfacecharge”, 但是这个是指离子交换树脂的表面电荷。
欢迎大家评论、讨论！
nn255 (2015-9-07 11:44:17)

离子交换肯定不是net charge,跟蛋白微环境下的侧链基团和resin的作用有关，在IEF中才是这个。
ps,楼主的帖子很有意思，自己的质量标准起了一个自己都不认识的缩写名称吗？
is2011 (2015-9-07 11:44:35)

标准不是我们单位起的，是从外界获得的。
131415 (2015-9-07 11:45:00)

QUOTE:
原帖由 牢骚科科长 于 2015-9-7 11:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

??
没有疑问的是：IEF和IEX-HPLC都可以用来分析单抗的电荷变异体。但是至于是否是“分的东西不一样，一个net charge，一个surface charge ”，却是值得商榷。
我由于也不敢太确定，就在网上查了一下，查询结果貌似显示，两者都是 ...
IEC-HPLC肯定不是net charge，与蛋白表面电荷分布有关，且与IEC填料基质性质有关；
相同的net charge，若电荷分布不同，IEC-HPLC可能会表现不一，但IEF表现一致；
相同表面电荷分布，相同填料带电基团，但填料基质性质不一，IEC-HPLC也会不一。
abc816 (2015-9-07 11:45:17)

看上去还是IEF靠谱啊，
问题是如需进行后续表征研究，IEF怎么回收样品呢？
vcve (2015-9-07 11:45:40)

QUOTE:
原帖由 abc816 于 2015-9-7 11:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

看上去还是IEF靠谱啊，
问题是如需进行后续表征研究，IEF怎么回收样品呢？
不是靠不靠谱的问题，而是，明知道两种方法分出来的东西有差异，大部分人都用其中一种方法了，也做了很多工作了，你还要用另一种方法么？
另外，如果是CIEF，就这个上样量来说，要回收到可以做普通液相表征的量，几乎是不可能，当然CE-MS除外。普通的IEF，只能看个pI。
shkudo (2015-9-07 11:46:01)

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原帖由 vcve 于 2015-9-7 11:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')

不是靠不靠谱的问题，而是，明知道两种方法分出来的东西有差异，大部分人都用其中一种方法了，也做了很多工作了，你还要用另一种方法么？
另外，如果是CIEF，就这个上样量来说，要回收到可以做普通液相表征的量，几乎是不可能，当然CE-MS ...
可现在的CE-MS技术也没办法在IEF聚焦后进MS啊~
969 (2015-9-07 11:48:02)

正在写文章，偶然想起园子里曾经讨论过，再来拿出来与大家共同探讨。IEF separates antibody variants based on overall charge difference (apparent pI), but, in addition to the overall charge, distribution of charge plays a critical role in the separation of antibody variants by chromatography because it may affect the interaction of antibodies with column resins.
《Chromatographic analysis of the acidic and basic species of recombinant monoclonal antibodies》文中的一段话。
以此看来，IEF机理的主要基于静电荷 pI值，IEC机理的除了pI，电荷分布更加重要。同时在做电荷异构体研究时，除了表征pI，可以采用IEF，cIEF，更精细的采用IEC更好。